青海医学院学报
青海醫學院學報
청해의학원학보
JOURNAL OF QINGHAI MEDICAL COLLEGE
2015年
2期
127-131
,共5页
mirRNA%mir63%p16INK4a%UTR
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目的 了解mir346和mir639对周期蛋白依赖激酶抑制剂2A(p16)基因表达的调控.方法 以定点突变法为基础,设计获得c.-21 C＞T和c.-34 G＞T p16INK4a5'-UTR突变型.用选定的mirRNA和包含野生型和突变型p16INK4a5'-UTR的pGL3质粒共转染.24小时后进行双萤光素酶试剂(Promega)检测分析和实时PCR定量分析.结果 Mir346和mir636相对mir639和mir935在MDF7和Mel28细胞有较高表达.随着mir346的导入,MCF7细胞野生型荧光酶活性显著降低(57％);突变型荧光酶活性也明显降低(39％).并且在mir346存在时,野生型和突变型都显示出相同程度的表达量.mir639对WM266细胞荧光酶活动没有表现出显著影响.结论 mir346在MCF7细胞可显著下调p16的表达,而mir639在WM266细胞对p16的表达没有显著影响.
目的 瞭解mir346和mir639對週期蛋白依賴激酶抑製劑2A(p16)基因錶達的調控.方法 以定點突變法為基礎,設計穫得c.-21 C＞T和c.-34 G＞T p16INK4a5'-UTR突變型.用選定的mirRNA和包含野生型和突變型p16INK4a5'-UTR的pGL3質粒共轉染.24小時後進行雙螢光素酶試劑(Promega)檢測分析和實時PCR定量分析.結果 Mir346和mir636相對mir639和mir935在MDF7和Mel28細胞有較高錶達.隨著mir346的導入,MCF7細胞野生型熒光酶活性顯著降低(57％);突變型熒光酶活性也明顯降低(39％).併且在mir346存在時,野生型和突變型都顯示齣相同程度的錶達量.mir639對WM266細胞熒光酶活動沒有錶現齣顯著影響.結論 mir346在MCF7細胞可顯著下調p16的錶達,而mir639在WM266細胞對p16的錶達沒有顯著影響.
목적 료해mir346화mir639대주기단백의뢰격매억제제2A(p16)기인표체적조공.방법 이정점돌변법위기출,설계획득c.-21 C＞T화c.-34 G＞T p16INK4a5'-UTR돌변형.용선정적mirRNA화포함야생형화돌변형p16INK4a5'-UTR적pGL3질립공전염.24소시후진행쌍형광소매시제(Promega)검측분석화실시PCR정량분석.결과 Mir346화mir636상대mir639화mir935재MDF7화Mel28세포유교고표체.수착mir346적도입,MCF7세포야생형형광매활성현저강저(57％);돌변형형광매활성야명현강저(39％).병차재mir346존재시,야생형화돌변형도현시출상동정도적표체량.mir639대WM266세포형광매활동몰유표현출현저영향.결론 mir346재MCF7세포가현저하조p16적표체,이mir639재WM266세포대p16적표체몰유현저영향.
