中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
6期
414-417
,共4页
孙娜娜%王琪%李慧昕%刘胜旺
孫娜娜%王琪%李慧昕%劉勝旺
손나나%왕기%리혜흔%류성왕
重组新城疫病毒%传染性喉气管炎病毒%gB蛋白%主要抗原表位基因
重組新城疫病毒%傳染性喉氣管炎病毒%gB蛋白%主要抗原錶位基因
중조신성역병독%전염성후기관염병독%gB단백%주요항원표위기인
recombinant Newcastle disease virus%infectious laryngotracheitis virus%gB protein%major antigen epitopes
为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV) gB主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码gB主要抗原表位的基因片段(1 bp～440 bp),将其插入到NDV感染性克隆pBR-FL中,构建含有ILTV gB主要抗原基因的NDVcDNA克隆pBR-FL-gB1-440.利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pCI-neo-NP、pCI-neo-P和pCI-neo-L的共同作用下,将重组质粒转染于表达T7聚合酶重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,获得重组病毒rL-gB1-440.采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明重组病毒中含有相应的外源基因.利用gB的抗血清检测重组病毒中gB的表达,间接免疫荧光试验表明,在感染重组病毒的BSR-T7/5细胞中目的蛋白得到表达.本研究为研制和开发传染性喉气管炎重组新城疫二联活疫苗奠定基础.
為構建以新城疫病毒(NDV)為活病毒載體錶達傳染性喉氣管炎病毒(ILTV) gB主要抗原錶位區域的重組病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA為模闆,通過PCR技術擴增1 323 bp ILTV編碼gB主要抗原錶位的基因片段(1 bp～440 bp),將其插入到NDV感染性剋隆pBR-FL中,構建含有ILTV gB主要抗原基因的NDVcDNA剋隆pBR-FL-gB1-440.利用燐痠鈣轉染法,在輔助質粒pCI-neo-NP、pCI-neo-P和pCI-neo-L的共同作用下,將重組質粒轉染于錶達T7聚閤酶重組痘病毒預感染的BSR-T7/5細胞,穫得重組病毒rL-gB1-440.採用RT-PCR檢測接種重組病毒的鷄胚尿囊液,結果錶明重組病毒中含有相應的外源基因.利用gB的抗血清檢測重組病毒中gB的錶達,間接免疫熒光試驗錶明,在感染重組病毒的BSR-T7/5細胞中目的蛋白得到錶達.本研究為研製和開髮傳染性喉氣管炎重組新城疫二聯活疫苗奠定基礎.
위구건이신성역병독(NDV)위활병독재체표체전염성후기관염병독(ILTV) gB주요항원표위구역적중조병독,본연구이ILTV LJS09주적DNA위모판,통과PCR기술확증1 323 bp ILTV편마gB주요항원표위적기인편단(1 bp～440 bp),장기삽입도NDV감염성극륭pBR-FL중,구건함유ILTV gB주요항원기인적NDVcDNA극륭pBR-FL-gB1-440.이용린산개전염법,재보조질립pCI-neo-NP、pCI-neo-P화pCI-neo-L적공동작용하,장중조질립전염우표체T7취합매중조두병독예감염적BSR-T7/5세포,획득중조병독rL-gB1-440.채용RT-PCR검측접충중조병독적계배뇨낭액,결과표명중조병독중함유상응적외원기인.이용gB적항혈청검측중조병독중gB적표체,간접면역형광시험표명,재감염중조병독적BSR-T7/5세포중목적단백득도표체.본연구위연제화개발전염성후기관염중조신성역이련활역묘전정기출.
