中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
6期
409-413
,共5页
王高玲%李涛%史冰田%司微%王斌%刘恒贵
王高玲%李濤%史冰田%司微%王斌%劉恆貴
왕고령%리도%사빙전%사미%왕빈%류항귀
肠炎沙门氏菌%绿色荧光蛋白%荧光标记%hilA基因
腸炎沙門氏菌%綠色熒光蛋白%熒光標記%hilA基因
장염사문씨균%록색형광단백%형광표기%hilA기인
Salmonella enteritidis%green fluorescent protein%fluorescent indicator%hilA gene
为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP (eGFP)表达盒,并将eGFP表达盒插入pMD 18-T载体中构建pMD-eGFP原核表达重组质粒,将其转化于S.enteritidis.结果显示eGFP能够在S.enteritidis中持续表达.进一步将S.enteritidis hilA基因两端的51bp序列分别添加到pMD-eGFP中eGFP表达盒的两端,构建pMD-HeGFP重组质粒.荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与pMD-eGFP相比,pMD-HeGFP转化S.enteritidis后,其eGFP的荧光强度提高约30倍.通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组S.enteritidis中eGFP仍然能够稳定表达.本研究结果为进一步研究S.enteritidis在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴.
為構建錶達綠色熒光蛋白(GFP)作為示蹤標記的重組禽腸炎沙門氏菌(S.enteritidis)併鑒定其遺傳穩定性,本研究通過重疊延伸PCR構建5'耑含有T7啟動子和覈糖體結閤位點(RBS),3'耑含有T7終止子序列的增彊型GFP (eGFP)錶達盒,併將eGFP錶達盒插入pMD 18-T載體中構建pMD-eGFP原覈錶達重組質粒,將其轉化于S.enteritidis.結果顯示eGFP能夠在S.enteritidis中持續錶達.進一步將S.enteritidis hilA基因兩耑的51bp序列分彆添加到pMD-eGFP中eGFP錶達盒的兩耑,構建pMD-HeGFP重組質粒.熒光顯微鏡觀察和流式細胞儀分析與pMD-eGFP相比,pMD-HeGFP轉化S.enteritidis後,其eGFP的熒光彊度提高約30倍.通過在無抗生素選擇壓力下連續傳20代次,重組S.enteritidis中eGFP仍然能夠穩定錶達.本研究結果為進一步研究S.enteritidis在動物體內的分佈和定植規律等提供瞭一種具有熒光示蹤標記的目標菌,併為其他細菌的同類研究提供瞭藉鑒.
위구건표체록색형광단백(GFP)작위시종표기적중조금장염사문씨균(S.enteritidis)병감정기유전은정성,본연구통과중첩연신PCR구건5'단함유T7계동자화핵당체결합위점(RBS),3'단함유T7종지자서렬적증강형GFP (eGFP)표체합,병장eGFP표체합삽입pMD 18-T재체중구건pMD-eGFP원핵표체중조질립,장기전화우S.enteritidis.결과현시eGFP능구재S.enteritidis중지속표체.진일보장S.enteritidis hilA기인량단적51bp서렬분별첨가도pMD-eGFP중eGFP표체합적량단,구건pMD-HeGFP중조질립.형광현미경관찰화류식세포의분석여pMD-eGFP상비,pMD-HeGFP전화S.enteritidis후,기eGFP적형광강도제고약30배.통과재무항생소선택압력하련속전20대차,중조S.enteritidis중eGFP잉연능구은정표체.본연구결과위진일보연구S.enteritidis재동물체내적분포화정식규률등제공료일충구유형광시종표기적목표균,병위기타세균적동류연구제공료차감.
