基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2015年
7期
884-888
,共5页
Rett综合征%Cdkl5%Mecp2%Bdnf
Rett綜閤徵%Cdkl5%Mecp2%Bdnf
Rett종합정%Cdkl5%Mecp2%Bdnf
Rett syndrome%Cdkl5%Mecp2%Bdnf
目的 探讨CDKL5在Rett综合征中与MeCP2相互作用的机制.方法 体外培养孕18 dSD胎鼠皮质神经元,通过小RNA干扰技术(siRNA)敲低Cdkl5,分为干扰组(Cdkl5 shRNA)和对照组(control shRNA).用Real time-PCR及Western blot法评估Cdkl5在mRNA和蛋白水平被敲低的效率;Cdkl5表达降低后Mecp2和Mecp2相关的下游靶基因表达变化.对Cdkl5 shRNA转染后神经元用CCK8法检测吸光度值评估神经元活力;用real time-PCR和West-em blot法检测凋亡基因caspase3和凋亡活性蛋白cleaved-caspase3评估神经元凋亡状态.结果 干扰组与对照组比较,Cdkl5在mRNA水平下降73％,在蛋白水平下降75％(P＜0.05);Mecp2在mRNA和蛋白水平升高约2倍(P ＜0.05);BdnfⅪ在mRNA水平明显下降,Psd95在mRNA水平明显上升(P＜0.05).结论 建立稳定的Cdkl5基因敲低的原代皮质神经元模型,并初步提示CDKL5可能通过对MeCP2的调控诱导了下游靶基因的变化.
目的 探討CDKL5在Rett綜閤徵中與MeCP2相互作用的機製.方法 體外培養孕18 dSD胎鼠皮質神經元,通過小RNA榦擾技術(siRNA)敲低Cdkl5,分為榦擾組(Cdkl5 shRNA)和對照組(control shRNA).用Real time-PCR及Western blot法評估Cdkl5在mRNA和蛋白水平被敲低的效率;Cdkl5錶達降低後Mecp2和Mecp2相關的下遊靶基因錶達變化.對Cdkl5 shRNA轉染後神經元用CCK8法檢測吸光度值評估神經元活力;用real time-PCR和West-em blot法檢測凋亡基因caspase3和凋亡活性蛋白cleaved-caspase3評估神經元凋亡狀態.結果 榦擾組與對照組比較,Cdkl5在mRNA水平下降73％,在蛋白水平下降75％(P＜0.05);Mecp2在mRNA和蛋白水平升高約2倍(P ＜0.05);BdnfⅪ在mRNA水平明顯下降,Psd95在mRNA水平明顯上升(P＜0.05).結論 建立穩定的Cdkl5基因敲低的原代皮質神經元模型,併初步提示CDKL5可能通過對MeCP2的調控誘導瞭下遊靶基因的變化.
목적 탐토CDKL5재Rett종합정중여MeCP2상호작용적궤제.방법 체외배양잉18 dSD태서피질신경원,통과소RNA간우기술(siRNA)고저Cdkl5,분위간우조(Cdkl5 shRNA)화대조조(control shRNA).용Real time-PCR급Western blot법평고Cdkl5재mRNA화단백수평피고저적효솔;Cdkl5표체강저후Mecp2화Mecp2상관적하유파기인표체변화.대Cdkl5 shRNA전염후신경원용CCK8법검측흡광도치평고신경원활력;용real time-PCR화West-em blot법검측조망기인caspase3화조망활성단백cleaved-caspase3평고신경원조망상태.결과 간우조여대조조비교,Cdkl5재mRNA수평하강73％,재단백수평하강75％(P＜0.05);Mecp2재mRNA화단백수평승고약2배(P ＜0.05);BdnfⅪ재mRNA수평명현하강,Psd95재mRNA수평명현상승(P＜0.05).결론 건립은정적Cdkl5기인고저적원대피질신경원모형,병초보제시CDKL5가능통과대MeCP2적조공유도료하유파기인적변화.
