中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
6期
438-443
,共6页
张永宁%吴绍强%宋姗姗%董宣%林祥梅
張永寧%吳紹彊%宋姍姍%董宣%林祥梅
장영저%오소강%송산산%동선%림상매
施马伦贝格病毒%核衣壳蛋白%B HK-21细胞%慢病毒载体
施馬倫貝格病毒%覈衣殼蛋白%B HK-21細胞%慢病毒載體
시마륜패격병독%핵의각단백%B HK-21세포%만병독재체
Schmallenberg virus%nucleocapsid (N) protein%BHK-21 cells%lentivirus vector
为建立稳定表达施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳(N)蛋白的BHK-21细胞系,本研究在SBV-N蛋白编码基因的C端加入6个组氨酸(6 ×His)标签,将其克隆至慢病毒载体pLV-EGFP-C中构建重组慢病毒质粒pLV-EGFP-SBV-N,将其与慢病毒包装质粒pHelperl.0和pHelper2.0共转染HEK-293T细胞,包装表达SBV-N蛋白的慢病毒.将重组慢病毒在聚凝胺(Polybrene)的介导下感染BHK-21细胞,采用嘌呤霉素(Puromycin)法和细胞有限稀释法筛选出一株稳定表达SBV-N蛋白的BHK-21细胞系,命名为BHK-21-EGFP-SBV-N.间接免疫荧光试验进一步表明,该细胞系能够被SBV抗体阳性动物血清和特异性单克隆抗体2C8识别.稳定表达SBV-N蛋白的BHK-21细胞系的建立,为SBV血清学检测方法的建立提供材料.
為建立穩定錶達施馬倫貝格病毒(SBV)覈衣殼(N)蛋白的BHK-21細胞繫,本研究在SBV-N蛋白編碼基因的C耑加入6箇組氨痠(6 ×His)標籤,將其剋隆至慢病毒載體pLV-EGFP-C中構建重組慢病毒質粒pLV-EGFP-SBV-N,將其與慢病毒包裝質粒pHelperl.0和pHelper2.0共轉染HEK-293T細胞,包裝錶達SBV-N蛋白的慢病毒.將重組慢病毒在聚凝胺(Polybrene)的介導下感染BHK-21細胞,採用嘌呤黴素(Puromycin)法和細胞有限稀釋法篩選齣一株穩定錶達SBV-N蛋白的BHK-21細胞繫,命名為BHK-21-EGFP-SBV-N.間接免疫熒光試驗進一步錶明,該細胞繫能夠被SBV抗體暘性動物血清和特異性單剋隆抗體2C8識彆.穩定錶達SBV-N蛋白的BHK-21細胞繫的建立,為SBV血清學檢測方法的建立提供材料.
위건립은정표체시마륜패격병독(SBV)핵의각(N)단백적BHK-21세포계,본연구재SBV-N단백편마기인적C단가입6개조안산(6 ×His)표첨,장기극륭지만병독재체pLV-EGFP-C중구건중조만병독질립pLV-EGFP-SBV-N,장기여만병독포장질립pHelperl.0화pHelper2.0공전염HEK-293T세포,포장표체SBV-N단백적만병독.장중조만병독재취응알(Polybrene)적개도하감염BHK-21세포,채용표령매소(Puromycin)법화세포유한희석법사선출일주은정표체SBV-N단백적BHK-21세포계,명명위BHK-21-EGFP-SBV-N.간접면역형광시험진일보표명,해세포계능구피SBV항체양성동물혈청화특이성단극륭항체2C8식별.은정표체SBV-N단백적BHK-21세포계적건립,위SBV혈청학검측방법적건립제공재료.
