养猪
養豬
양저
SWINE PRODUCTION
2015年
4期
69-72
,共4页
刘林清%李凤娥%熊远著%邓昌彦
劉林清%李鳳娥%熊遠著%鄧昌彥
류림청%리봉아%웅원저%산창언
猪%ALAS1%序列分析%表达模式
豬%ALAS1%序列分析%錶達模式
저%ALAS1%서렬분석%표체모식
pig%ALAS1%sequence analysis%expression pattern
目的：首先克隆了猪ALAS1（5-aminolevulinate synthase 1）DNA序列，并对CDS序列进行了序列分析，分析了该基因的表达模式。方法：以4月龄长大母猪的卵巢为材料，运用同源序列克隆技术，对猪ALAS1 DNA序列进行克隆并对其进行生物信息学分析；利用性腺激素处理卵巢颗粒细胞并结合RT-PCR方法分析了猪ALAS1基因的表达模式。结果：克隆得到了猪ALAS1 DNA序列9137 bp，其中包括53 bp的5'非编码区序列、1922 bp的CDS序列和2～9内含子序列，共编码640个氨基酸；猪ALAS1蛋白氨基酸序列与人和小鼠的相似性一致（100%）；ALAS1蛋白的分子量约为38.0 KDa，等电点为9.07，可能存在10个PKC磷酸化位点、1个CAMP磷酸化位点、4个N-糖基化位点、12个豆蔻酰化位点、3个CKII磷酸化位点和1个酰胺位点，还包含1个天冬酰胺转氨酶超家族（AAT-1）保守结构域；猪ALAS1在性腺激素处理2个卵巢颗粒细胞后，可检测到该基因在卵巢颗粒细胞中的显著性表达，之后其表达量迅速下降，12 h后表达量又提高，之后表达量再次迅速下降。结论：猪ALAS1基因的CDS区在物种间保守性强，推测猪ALAS1基因参与卵泡的发育和排卵及在黄体化过程中发挥一定作用。
目的：首先剋隆瞭豬ALAS1（5-aminolevulinate synthase 1）DNA序列，併對CDS序列進行瞭序列分析，分析瞭該基因的錶達模式。方法：以4月齡長大母豬的卵巢為材料，運用同源序列剋隆技術，對豬ALAS1 DNA序列進行剋隆併對其進行生物信息學分析；利用性腺激素處理卵巢顆粒細胞併結閤RT-PCR方法分析瞭豬ALAS1基因的錶達模式。結果：剋隆得到瞭豬ALAS1 DNA序列9137 bp，其中包括53 bp的5'非編碼區序列、1922 bp的CDS序列和2～9內含子序列，共編碼640箇氨基痠；豬ALAS1蛋白氨基痠序列與人和小鼠的相似性一緻（100%）；ALAS1蛋白的分子量約為38.0 KDa，等電點為9.07，可能存在10箇PKC燐痠化位點、1箇CAMP燐痠化位點、4箇N-糖基化位點、12箇豆蔻酰化位點、3箇CKII燐痠化位點和1箇酰胺位點，還包含1箇天鼕酰胺轉氨酶超傢族（AAT-1）保守結構域；豬ALAS1在性腺激素處理2箇卵巢顆粒細胞後，可檢測到該基因在卵巢顆粒細胞中的顯著性錶達，之後其錶達量迅速下降，12 h後錶達量又提高，之後錶達量再次迅速下降。結論：豬ALAS1基因的CDS區在物種間保守性彊，推測豬ALAS1基因參與卵泡的髮育和排卵及在黃體化過程中髮揮一定作用。
목적：수선극륭료저ALAS1（5-aminolevulinate synthase 1）DNA서렬，병대CDS서렬진행료서렬분석，분석료해기인적표체모식。방법：이4월령장대모저적란소위재료，운용동원서렬극륭기술，대저ALAS1 DNA서렬진행극륭병대기진행생물신식학분석；이용성선격소처리란소과립세포병결합RT-PCR방법분석료저ALAS1기인적표체모식。결과：극륭득도료저ALAS1 DNA서렬9137 bp，기중포괄53 bp적5'비편마구서렬、1922 bp적CDS서렬화2～9내함자서렬，공편마640개안기산；저ALAS1단백안기산서렬여인화소서적상사성일치（100%）；ALAS1단백적분자량약위38.0 KDa，등전점위9.07，가능존재10개PKC린산화위점、1개CAMP린산화위점、4개N-당기화위점、12개두구선화위점、3개CKII린산화위점화1개선알위점，환포함1개천동선알전안매초가족（AAT-1）보수결구역；저ALAS1재성선격소처리2개란소과립세포후，가검측도해기인재란소과립세포중적현저성표체，지후기표체량신속하강，12 h후표체량우제고，지후표체량재차신속하강。결론：저ALAS1기인적CDS구재물충간보수성강，추측저ALAS1기인삼여란포적발육화배란급재황체화과정중발휘일정작용。
Objective: The genomic sequence of porcine ALAS1 gene was cloned and temporal and spatial expression pattern of ALAS1 gene was studied.Method:According to the related CDS sequences of other species were measured.The structure of the porcine ALAS1 gene analyzed by bioinformatics methods.The expression pattern of ALAS1 gene were analysis by RT-PCR by treatment with PMSG/HCG in ovarian granulosa cells. Result:We cloned a 9 137 bp genomic sequence of ALAS1 gene,which containing 53 bp of 5' untranslated sequence,its 2~9 intron sequences,1 922 bp complete open reading fragment (ORF) encoding a protein of 640 amino acids.The amino acid sequences exhibited the greatest identity with Human (100%) and mus (100%).The molecular weight,PI of ALAS1 were 38.0 KDa and the predicted isoelectric point is 9.07.There were 10 PKC_PHOSPHO_SITE,1 CAMP_PHOSPHO_SITE,4 N-glycosylation site,12 N-myristoylation site,3 CK2_PHOSPHO_SITE,1 amidation site and contain one conserved domains(AAT-1) in ALAS1 protein.The highly levels of ALAS1 gene are observed at 2 h,12 h by PMSG/HCG,and the time of follicular development and the low level ALAS1 gene are observed at 4~10 h and 16~24 h by PMSG/HCG,and the time of ovulation and follicle luteinization. Conclusion:The result indicates that ALAS1 gene is highly conservative among species and the porcine ALAS1 involved in the regulation of follicular development,ovulation and even luteinizing process,plays a role in the process of ovulation.
