CAJ | 학술논문

探索适宜厚朴(Magnolia officinalis)简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)-聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的最佳条件.在SSR引物筛选基础上,利用正交试验设计对影响PCR反应的5个因素(模板DNA、引物、Mg2+、dNTPs和Taq酶催化活性浓度)进行4个水平的优化,并通过温度梯度试验优化引物退火温度.在厚朴及其近缘物种的70对引物中,筛选出13对扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物.PCR各因素在不同水平下对反应体系的影响由大到小依次为引物浓度、Taq酶催化活性浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度和模板DNA浓度.PCR最佳优化体系:25 μL体系中,模板DNA质量浓度为2 ng·μL-1,引物浓度为0.6μmol·L-1,Mg2+浓度为2.0 mmol·L-1,dNTPs浓度为0.5 mmol·L-1,Taq酶催化活性浓度为0.03 U·μL-1(1U=16.67 nkat).最佳扩增程序:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,48.0～59.0℃(退火温度随引物不同而定)退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环后72℃延伸10 min.上述结果可为利用SSR-PCR技术研究濒危厚朴群体遗传学和分子生态学提供技术参数.
탐색괄의후박(Magnolia officinalis)간단중복서렬(simple sequence repeat,SSR)-취합매련식반응(polymerase chain reaction,PCR)적최가조건.재SSR인물사선기출상,이용정교시험설계대영향PCR반응적5개인소(모판DNA、인물、Mg2+、dNTPs화Taq매최화활성농도)진행4개수평적우화,병통과온도제도시험우화인물퇴화온도.재후박급기근연물충적70대인물중,사선출13대확증조대청석、다태성봉부적SSR인물.PCR각인소재불동수평하대반응체계적영향유대도소의차위인물농도、Taq매최화활성농도、Mg2+농도、dNTPs농도화모판DNA농도.PCR최가우화체계:25 μL체계중,모판DNA질량농도위2 ng·μL-1,인물농도위0.6μmol·L-1,Mg2+농도위2.0 mmol·L-1,dNTPs농도위0.5 mmol·L-1,Taq매최화활성농도위0.03 U·μL-1(1U=16.67 nkat).최가확증정서:94℃예변성4 min,94℃변성30 s,48.0～59.0℃(퇴화온도수인물불동이정)퇴화30 s,72℃연신1 min,35개순배후72℃연신10 min.상술결과가위이용SSR-PCR기술연구빈위후박군체유전학화분자생태학제공기술삼수.