辣椒杂志
辣椒雜誌
랄초잡지
JOURNAL OF CHINA CAPSICUM
2015年
2期
42-50
,共9页
Kana Ogawa%Katsunori Murota%Hanako Shimura%Misaki Furuya%Yasuko Togawa%Takeshi Matsumura%Chikara Masuta%马义花%孔秋生
Kana Ogawa%Katsunori Murota%Hanako Shimura%Misaki Furuya%Yasuko Togawa%Takeshi Matsumura%Chikara Masuta%馬義花%孔鞦生
Kana Ogawa%Katsunori Murota%Hanako Shimura%Misaki Furuya%Yasuko Togawa%Takeshi Matsumura%Chikara Masuta%마의화%공추생
Capsicum%pAMT%Pun1%原生质体试验%辛辣%香草基胺%病毒介导的基因沉默
Capsicum%pAMT%Pun1%原生質體試驗%辛辣%香草基胺%病毒介導的基因沉默
Capsicum%pAMT%Pun1%원생질체시험%신랄%향초기알%병독개도적기인침묵
背景:辣椒素类物质,包括辣椒素及其类似物,是导致辣椒果实辛辣的原因.尽管辣椒素为人熟知并且每天都会用到,但是对于辣椒素合成途径中的相关基因并不是完全了解.已有研究表明,pAMT和Pun1编码的蛋白分别催化辣椒素合成途径中的第二步和最后一步反应,并且Pun1编码的蛋白具有辣椒素合酶活性.然而,并没有直接的证据证明Pun1具有辣椒素合酶活性.结果:为了证明Pun1蛋白在辣椒素合成中的作用,我们利用大肠杆菌合成了抗Pun1蛋白抗体,利用该抗体拮抗内源的Pun1活性.同时通过病毒介导的基因沉默技术靶定了Pun1的mRNA,以确认抗Pun1抗体的特异性.在Pun1下调表达的胎座组织中,利用该抗体进行western blot,检测到Pun1蛋白的积累减少,同时辣椒素在胎座中的积累量也降低.从胎座组织中分离得到原生质体,在体外进行辣椒素的从头合成,加入抗Pun1抗体之后,辣椒素的合成受到抑制.通过分析不同辣椒品种的pAMT和Pun1的表达,我们发现辣椒素的高水平积累总是伴随着pAMT和Pun1的高水平表达,也就是说这两个基因对辣椒素合成很重要.比较有辣味辣椒和无辣味辣椒的香草基胺(辣椒素合成的前体物质)和辣椒素的积累水平,结果表明:在辛辣味辣椒中香草基胺的含量很低,推测可能是香草基胺合成之后,Pun1把香草基胺快速转化为辣椒素;而在无辣味辣椒中由于缺乏Pun1,香草基胺的含量积累到很高的水平.结论:对辣椒素从头合成途径和抗Pun1抗体进行原生质体试验,证明了Pun1基因及其产物参与了辣椒素的合成.与辣椒素的积累相比较,分析香草基胺的积累过程,揭示了Pun1是辣椒素和香草基胺积累水平的决定因素.
揹景:辣椒素類物質,包括辣椒素及其類似物,是導緻辣椒果實辛辣的原因.儘管辣椒素為人熟知併且每天都會用到,但是對于辣椒素閤成途徑中的相關基因併不是完全瞭解.已有研究錶明,pAMT和Pun1編碼的蛋白分彆催化辣椒素閤成途徑中的第二步和最後一步反應,併且Pun1編碼的蛋白具有辣椒素閤酶活性.然而,併沒有直接的證據證明Pun1具有辣椒素閤酶活性.結果:為瞭證明Pun1蛋白在辣椒素閤成中的作用,我們利用大腸桿菌閤成瞭抗Pun1蛋白抗體,利用該抗體拮抗內源的Pun1活性.同時通過病毒介導的基因沉默技術靶定瞭Pun1的mRNA,以確認抗Pun1抗體的特異性.在Pun1下調錶達的胎座組織中,利用該抗體進行western blot,檢測到Pun1蛋白的積纍減少,同時辣椒素在胎座中的積纍量也降低.從胎座組織中分離得到原生質體,在體外進行辣椒素的從頭閤成,加入抗Pun1抗體之後,辣椒素的閤成受到抑製.通過分析不同辣椒品種的pAMT和Pun1的錶達,我們髮現辣椒素的高水平積纍總是伴隨著pAMT和Pun1的高水平錶達,也就是說這兩箇基因對辣椒素閤成很重要.比較有辣味辣椒和無辣味辣椒的香草基胺(辣椒素閤成的前體物質)和辣椒素的積纍水平,結果錶明:在辛辣味辣椒中香草基胺的含量很低,推測可能是香草基胺閤成之後,Pun1把香草基胺快速轉化為辣椒素;而在無辣味辣椒中由于缺乏Pun1,香草基胺的含量積纍到很高的水平.結論:對辣椒素從頭閤成途徑和抗Pun1抗體進行原生質體試驗,證明瞭Pun1基因及其產物參與瞭辣椒素的閤成.與辣椒素的積纍相比較,分析香草基胺的積纍過程,揭示瞭Pun1是辣椒素和香草基胺積纍水平的決定因素.
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