西部医学
西部醫學
서부의학
MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
2015年
8期
1124-1127
,共4页
短发夹RNA%paralemmin-3%重组腺病毒载体%RNA干扰%急性肺损伤
短髮夾RNA%paralemmin-3%重組腺病毒載體%RNA榦擾%急性肺損傷
단발협RNA%paralemmin-3%중조선병독재체%RNA간우%급성폐손상
Short hairpin RNA%Paralemmin-3%Recombinant adenovirus%RNA interfering%Acute lung injury
目的 构建靶向大鼠pa ralemmin-3 (PALM3)基因的短发夹shRNA(RNA)重组腺病毒载体,干扰大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AE2 cells)中PALM3的表达.方法 设计大鼠靶向PALM3基因的shRNA,插入穿梭质粒pGV120-EGFP,行PCR、测序鉴定;将穿梭质粒和骨架质粒共转293细胞,进行重组腺病毒Ad-palm3-shRNA-EGFP的包装,并采用TCID50法测定病毒感染滴度;用此病毒感染大鼠AE2细胞,Western blot法检测细胞内PALM3蛋白表达.结果 穿梭质粒pGV120-palm3-shRNA-EGFP经PCR及测序鉴定证实构建成功,进一步构建了表达大鼠PALM3基因shRNA的重组腺病毒载体Ad-palm3-shRNA-EGFP,重组腺病毒感染滴度为3×1010 pfu/mL,感染大鼠AE2细胞后显著抑制目的蛋白表达(P＜0.05).结论 本实验成功构建了针对大鼠PALM3基因的shRNA重组腺病毒,显著下调了大鼠AE2细胞中PALM3的表达,为进一步探索PALM3在炎性失控性疾病中的作用奠定基础.
目的 構建靶嚮大鼠pa ralemmin-3 (PALM3)基因的短髮夾shRNA(RNA)重組腺病毒載體,榦擾大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞(AE2 cells)中PALM3的錶達.方法 設計大鼠靶嚮PALM3基因的shRNA,插入穿梭質粒pGV120-EGFP,行PCR、測序鑒定;將穿梭質粒和骨架質粒共轉293細胞,進行重組腺病毒Ad-palm3-shRNA-EGFP的包裝,併採用TCID50法測定病毒感染滴度;用此病毒感染大鼠AE2細胞,Western blot法檢測細胞內PALM3蛋白錶達.結果 穿梭質粒pGV120-palm3-shRNA-EGFP經PCR及測序鑒定證實構建成功,進一步構建瞭錶達大鼠PALM3基因shRNA的重組腺病毒載體Ad-palm3-shRNA-EGFP,重組腺病毒感染滴度為3×1010 pfu/mL,感染大鼠AE2細胞後顯著抑製目的蛋白錶達(P＜0.05).結論 本實驗成功構建瞭針對大鼠PALM3基因的shRNA重組腺病毒,顯著下調瞭大鼠AE2細胞中PALM3的錶達,為進一步探索PALM3在炎性失控性疾病中的作用奠定基礎.
목적 구건파향대서pa ralemmin-3 (PALM3)기인적단발협shRNA(RNA)중조선병독재체,간우대서Ⅱ형폐포상피세포(AE2 cells)중PALM3적표체.방법 설계대서파향PALM3기인적shRNA,삽입천사질립pGV120-EGFP,행PCR、측서감정;장천사질립화골가질립공전293세포,진행중조선병독Ad-palm3-shRNA-EGFP적포장,병채용TCID50법측정병독감염적도;용차병독감염대서AE2세포,Western blot법검측세포내PALM3단백표체.결과 천사질립pGV120-palm3-shRNA-EGFP경PCR급측서감정증실구건성공,진일보구건료표체대서PALM3기인shRNA적중조선병독재체Ad-palm3-shRNA-EGFP,중조선병독감염적도위3×1010 pfu/mL,감염대서AE2세포후현저억제목적단백표체(P＜0.05).결론 본실험성공구건료침대대서PALM3기인적shRNA중조선병독,현저하조료대서AE2세포중PALM3적표체,위진일보탐색PALM3재염성실공성질병중적작용전정기출.
