宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2015年
6期
626-630
,共5页
胡健%裴秀英%苏芹%王博%高玉婧%蒲静%张宁
鬍健%裴秀英%囌芹%王博%高玉婧%蒲靜%張寧
호건%배수영%소근%왕박%고옥청%포정%장저
结核分枝杆菌%TB10.4%免疫原性
結覈分枝桿菌%TB10.4%免疫原性
결핵분지간균%TB10.4%면역원성
mycobacterium tuberculosis%TB10.4%immunogenicity
目的 构建结核分枝杆菌TB10.4基因的原核表达载体,表达和纯化该蛋白,构建亚单位疫苗,并对其免疫原性进行研究.方法 从重组质粒pET-SUMO-TB 10.4获得基因片断后,将其插入到载体pET-28a(+),转化Ecoli DH5α感受态细胞,随机筛选阳性克隆,测序正确后并将该重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化并复性.随机将C57BL/6雌性小鼠分为Tris-HCl组、TB10.4组(佐剂为DDA/Poly I:C)及卡介苗(BCG)3组,每组10只,每只小鼠每次免疫200μL,其中DDA250μg及Poly I:C 25μg,蛋白量为20μg,而BCG为5×106 CFU,分别于1、4、7周皮下免疫小鼠.末次免疫4周后,用特异性抗原TB10.4刺激脾淋巴细胞,检测其分泌IFN-γ水平;用ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1.结果 构建了原核表达重组质粒pET-28a-TB10.4,并在分子量约为10.4kDa处观察到蛋白条带;小鼠血清中产生特异性抗体IgG2b与IgG1,体外脾淋巴细胞受TB10.4刺激时分泌IFN-γ水平显著高于Tris-HCl组(P＜0.05)及BCG组(P＜0.05).结论 TB10.4蛋白与佐剂构建了亚单位疫苗,该疫苗可在C57BL/7小鼠中诱导抗原特异性免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究.
目的 構建結覈分枝桿菌TB10.4基因的原覈錶達載體,錶達和純化該蛋白,構建亞單位疫苗,併對其免疫原性進行研究.方法 從重組質粒pET-SUMO-TB 10.4穫得基因片斷後,將其插入到載體pET-28a(+),轉化Ecoli DH5α感受態細胞,隨機篩選暘性剋隆,測序正確後併將該重組質粒轉化感受態大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達,經SDS-PAGE分析後,用Ni-NTA親和層析柱進行純化併複性.隨機將C57BL/6雌性小鼠分為Tris-HCl組、TB10.4組(佐劑為DDA/Poly I:C)及卡介苗(BCG)3組,每組10隻,每隻小鼠每次免疫200μL,其中DDA250μg及Poly I:C 25μg,蛋白量為20μg,而BCG為5×106 CFU,分彆于1、4、7週皮下免疫小鼠.末次免疫4週後,用特異性抗原TB10.4刺激脾淋巴細胞,檢測其分泌IFN-γ水平;用ELISA檢測血清特異性抗體IgG2b、IgG1.結果 構建瞭原覈錶達重組質粒pET-28a-TB10.4,併在分子量約為10.4kDa處觀察到蛋白條帶;小鼠血清中產生特異性抗體IgG2b與IgG1,體外脾淋巴細胞受TB10.4刺激時分泌IFN-γ水平顯著高于Tris-HCl組(P＜0.05)及BCG組(P＜0.05).結論 TB10.4蛋白與佐劑構建瞭亞單位疫苗,該疫苗可在C57BL/7小鼠中誘導抗原特異性免疫應答,可作為新型結覈亞單位疫苗的候選疫苗予以進一步研究.
목적 구건결핵분지간균TB10.4기인적원핵표체재체,표체화순화해단백,구건아단위역묘,병대기면역원성진행연구.방법 종중조질립pET-SUMO-TB 10.4획득기인편단후,장기삽입도재체pET-28a(+),전화Ecoli DH5α감수태세포,수궤사선양성극륭,측서정학후병장해중조질립전화감수태대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체,경SDS-PAGE분석후,용Ni-NTA친화층석주진행순화병복성.수궤장C57BL/6자성소서분위Tris-HCl조、TB10.4조(좌제위DDA/Poly I:C)급잡개묘(BCG)3조,매조10지,매지소서매차면역200μL,기중DDA250μg급Poly I:C 25μg,단백량위20μg,이BCG위5×106 CFU,분별우1、4、7주피하면역소서.말차면역4주후,용특이성항원TB10.4자격비림파세포,검측기분비IFN-γ수평;용ELISA검측혈청특이성항체IgG2b、IgG1.결과 구건료원핵표체중조질립pET-28a-TB10.4,병재분자량약위10.4kDa처관찰도단백조대;소서혈청중산생특이성항체IgG2b여IgG1,체외비림파세포수TB10.4자격시분비IFN-γ수평현저고우Tris-HCl조(P＜0.05)급BCG조(P＜0.05).결론 TB10.4단백여좌제구건료아단위역묘,해역묘가재C57BL/7소서중유도항원특이성면역응답,가작위신형결핵아단위역묘적후선역묘여이진일보연구.
