南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2015年
5期
882-887
,共6页
罗婵%屈春凤%李辉%雷钏%周宇%刘庆友%蒋建荣%石德顺
囉嬋%屈春鳳%李輝%雷釧%週宇%劉慶友%蔣建榮%石德順
라선%굴춘봉%리휘%뢰천%주우%류경우%장건영%석덕순
水牛%人干扰素%核转染%细胞株%表达分析
水牛%人榦擾素%覈轉染%細胞株%錶達分析
수우%인간우소%핵전염%세포주%표체분석
buffalo%human interferon%nucleofection%cell strains%expression analysis
[目的]从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据.[方法]建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体导入Bcap-37细胞,建立转基因细胞株,然后分别从RNA水平和蛋白质水平对其能否正常表达人IFNα-2b进行分析.[结果]电压是影响Bcap-37细胞核转染效率的关键因素,对其进行优化(电压275 V、电击时间10 ms)后的核转染效率可达81.1％.使用优化后的核转染方法可将水牛乳腺特异性表达载体pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo和pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功转入Bcap-37细胞而获得转人IFNα-2b细胞株,经IFNα-2b基因的mRNA表达丰度及IFNα-2b蛋白的Western blotting检测,证实在两株转基因细胞系中均能顺利进行IFNα-26基因的转录与翻译.[结论]建立的核转染法能高效转染Bcap-37细胞,可应用该方法在细胞水平上对携带人IFNα-2b基因水牛乳腺特异性表达载体的表达能力进行分析,并证实乳腺特异性表达载体(pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo和pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反应器的制备.
[目的]從細胞水平探討應用水牛乳腺生物反應器生產人榦擾素α-2b(IFNα-2b)的可行性,為水牛乳腺生物反應器的製備提供參攷依據.[方法]建立併優化覈轉染人乳腺癌細胞Bcap-37的方法,再利用該方法將水牛乳腺特異性錶達人IFNα-2b載體導入Bcap-37細胞,建立轉基因細胞株,然後分彆從RNA水平和蛋白質水平對其能否正常錶達人IFNα-2b進行分析.[結果]電壓是影響Bcap-37細胞覈轉染效率的關鍵因素,對其進行優化(電壓275 V、電擊時間10 ms)後的覈轉染效率可達81.1％.使用優化後的覈轉染方法可將水牛乳腺特異性錶達載體pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo和pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功轉入Bcap-37細胞而穫得轉人IFNα-2b細胞株,經IFNα-2b基因的mRNA錶達豐度及IFNα-2b蛋白的Western blotting檢測,證實在兩株轉基因細胞繫中均能順利進行IFNα-26基因的轉錄與翻譯.[結論]建立的覈轉染法能高效轉染Bcap-37細胞,可應用該方法在細胞水平上對攜帶人IFNα-2b基因水牛乳腺特異性錶達載體的錶達能力進行分析,併證實乳腺特異性錶達載體(pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo和pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反應器的製備.
[목적]종세포수평탐토응용수우유선생물반응기생산인간우소α-2b(IFNα-2b)적가행성,위수우유선생물반응기적제비제공삼고의거.[방법]건립병우화핵전염인유선암세포Bcap-37적방법,재이용해방법장수우유선특이성표체인IFNα-2b재체도입Bcap-37세포,건립전기인세포주,연후분별종RNA수평화단백질수평대기능부정상표체인IFNα-2b진행분석.[결과]전압시영향Bcap-37세포핵전염효솔적관건인소,대기진행우화(전압275 V、전격시간10 ms)후적핵전염효솔가체81.1％.사용우화후적핵전염방법가장수우유선특이성표체재체pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo화pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo성공전입Bcap-37세포이획득전인IFNα-2b세포주,경IFNα-2b기인적mRNA표체봉도급IFNα-2b단백적Western blotting검측,증실재량주전기인세포계중균능순리진행IFNα-26기인적전록여번역.[결론]건립적핵전염법능고효전염Bcap-37세포,가응용해방법재세포수평상대휴대인IFNα-2b기인수우유선특이성표체재체적표체능력진행분석,병증실유선특이성표체재체(pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo화pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo)균능용우수우유선생물반응기적제비.
