转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立
전기인연초중외원기인실시형광정량PCR검측방법적건립
Detection method of exogenous gene in transgenic tobacco by real-time fluorescence quantitative PCR
  • 万方数据
    南方农业学报 남방농업학보
    GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
    2015年 5期 745-749 ,共5页

    王盛%谢芝勋%谢丽基%谢志勤%黄莉%罗思思%邓显文%黄娇玲%刘加波

    왕성%사지훈%사려기%사지근%황리%라사사%산현문%황교령%류가파

    转基因烟草%双标准曲线法%外源基因%拷贝数%SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR 轉基因煙草%雙標準麯線法%外源基因%拷貝數%SYBR Green Ⅰ實時熒光定量PCR
    전기인연초%쌍표준곡선법%외원기인%고패수%SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR
    transgenic tobacco%double standard curves%exogenous gene%copy number%SYBR Green Ⅰ real-time quantitative PCR
    [目的]建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,为转基因植物中外源基因拷贝数的检测提供参考.[方法]采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数,以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因,建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法.[结果]构建RNR2基因、GFP基因实时荧光定量PCR的标准曲线,分别为y=-0.2858x+5.6695和y=0.2826x+2.1048,R2分别为0.9994和0.9989,相关性较高.在检测的5株转基因烟草中GFP基因的拷贝数分别为5、8、19、28和45,非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0.[结论]建立的转基因烟草中外源基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法具有简单、快速、准确等优点,可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析.
    [목적]건립SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR검측전기인연초중외원기인고패수적방법,위전기인식물중외원기인고패수적검측제공삼고.[방법]채용SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR방법,검측전기인연초중외원록색형광단백기인(GFP)적고패수,이연초단고패적내원핵당핵산환원매기인(RNR2)작위내삼기인,건립상대정량적쌍표준곡선법검측전기인연초중외원기인고패수적방법.[결과]구건RNR2기인、GFP기인실시형광정량PCR적표준곡선,분별위y=-0.2858x+5.6695화y=0.2826x+2.1048,R2분별위0.9994화0.9989,상관성교고.재검측적5주전기인연초중GFP기인적고패수분별위5、8、19、28화45,비전기인연초식주적GFP기인고패수위0.[결론]건립적전기인연초중외원기인SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR검측방법구유간단、쾌속、준학등우점,가용우기인공정중대우량전화식주적사선급외원기인표체량적쾌속검측화정량분석.
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