临床儿科杂志
臨床兒科雜誌
림상인과잡지
2015年
8期
738-742
,共5页
人支气管上皮细胞%孟鲁斯特%黏蛋白5AC%核因子κB
人支氣管上皮細胞%孟魯斯特%黏蛋白5AC%覈因子κB
인지기관상피세포%맹로사특%점단백5AC%핵인자κB
human bronchial epithelial cells%montelukast%mucin-5 subtype AC%nuclear factor kappa B
目的：探讨孟鲁斯特对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮细胞黏液蛋白分泌的影响。方法体外分离鉴定人原代支气管上皮细胞，LPS以1μg/ml剂量诱导细胞炎症反应，孟鲁斯特(50、20、10μmol/L)进行干预治疗，酶联免疫法(ELISA)检测分泌细胞上清黏蛋白5AC(MUC5AC)水平变化，并采用定量逆转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹(Western-blot)检测MUC5AC mRNA和蛋白表达情况；2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)变化；Western-blot检测孟鲁斯特干预治疗前后磷酸化细胞核转录因子κB(p-NF-κB)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、磷酸化细胞外调节激酶1,2(ERK1/2)活化情况。结果孟鲁斯特以剂量依赖性降低LPS诱导的人支气管上皮细胞内MUC5AC mRNA水平和蛋白水平，抑制ROS产生，抑制NF-κB/p-IκBα、ERK活化。结论孟鲁斯特在体外能抑制MUC5AC的产生，其机制可能与抑制NF-κB、EKR的激活有关。
目的：探討孟魯斯特對脂多糖(LPS)誘導的人支氣管上皮細胞黏液蛋白分泌的影響。方法體外分離鑒定人原代支氣管上皮細胞，LPS以1μg/ml劑量誘導細胞炎癥反應，孟魯斯特(50、20、10μmol/L)進行榦預治療，酶聯免疫法(ELISA)檢測分泌細胞上清黏蛋白5AC(MUC5AC)水平變化，併採用定量逆轉錄PCR(RT-PCR)、免疫印跡(Western-blot)檢測MUC5AC mRNA和蛋白錶達情況；2’,7’-二氯熒光黃雙乙痠鹽(DCFH-DA)熒光探針檢測活性氧(ROS)變化；Western-blot檢測孟魯斯特榦預治療前後燐痠化細胞覈轉錄因子κB(p-NF-κB)、燐痠化NF-κB抑製蛋白(p-IκBα)、燐痠化細胞外調節激酶1,2(ERK1/2)活化情況。結果孟魯斯特以劑量依賴性降低LPS誘導的人支氣管上皮細胞內MUC5AC mRNA水平和蛋白水平，抑製ROS產生，抑製NF-κB/p-IκBα、ERK活化。結論孟魯斯特在體外能抑製MUC5AC的產生，其機製可能與抑製NF-κB、EKR的激活有關。
목적：탐토맹로사특대지다당(LPS)유도적인지기관상피세포점액단백분비적영향。방법체외분리감정인원대지기관상피세포，LPS이1μg/ml제량유도세포염증반응，맹로사특(50、20、10μmol/L)진행간예치료，매련면역법(ELISA)검측분비세포상청점단백5AC(MUC5AC)수평변화，병채용정량역전록PCR(RT-PCR)、면역인적(Western-blot)검측MUC5AC mRNA화단백표체정황；2’,7’-이록형광황쌍을산염(DCFH-DA)형광탐침검측활성양(ROS)변화；Western-blot검측맹로사특간예치료전후린산화세포핵전록인자κB(p-NF-κB)、린산화NF-κB억제단백(p-IκBα)、린산화세포외조절격매1,2(ERK1/2)활화정황。결과맹로사특이제량의뢰성강저LPS유도적인지기관상피세포내MUC5AC mRNA수평화단백수평，억제ROS산생，억제NF-κB/p-IκBα、ERK활화。결론맹로사특재체외능억제MUC5AC적산생，기궤제가능여억제NF-κB、EKR적격활유관。
ObjectiveTo investigate the effect of montelukast on the secretion of mucus protein in lipopolysaccharide (LPS) induced human bronchial epithelial cells.MethodsPrimary human bronchial epithelial cells were isolated and identiifed in vitro. LPS (1μg/mL) was used to induce cell inlfammatory response. Montelukast (50 μmol/L, 20μmol/L, 10μmol/L) was used as intervention. The concertration of mucin-5 subtype AC (MUC5AC) in cell supernatants was measured by ELISA. The expression levels of MUC5AC mRNA and protein were determined by RT-PCR and Western-blot. DCFH-DA lfuorescent probe was used to detect reactive oxygen species (ROS). To further elucidate the mechanism, NF-κB (p65)、IκBα、ERK1/2 phosphorylation be-fore and after montelukast intervention were determined by Western-blot.ResultsMontelukast decreases the expression levels of MUC5AC mRNA and protein in a dose-dependent manner in LPS induced human bronchial epithelial cells. Meanwhile, mon-teluskast suppresses ROS generation and NF-κB (p65)、IκBα、ERK1/2 phosphorylation.Conclusions In response to LPS in-duced inlfammation, montelukast decreases the expression level of MUC5AC in vitro, which may be related to NF-κB and ERK activation.
