华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2015年
4期
123-128
,共6页
崔喜艳%秦思余%刘忠野%高瑜%蒋载阳%郭继勋
崔喜豔%秦思餘%劉忠野%高瑜%蔣載暘%郭繼勛
최희염%진사여%류충야%고유%장재양%곽계훈
羊草%CDPK基因%基因克隆%原核表达
羊草%CDPK基因%基因剋隆%原覈錶達
양초%CDPK기인%기인극륭%원핵표체
Leymus chinensis%CDPK gene%gene cloning%prokaryotic expression
[目的]通过对羊草Leymus chinensis CDPK基因进行克隆及原核表达,为进一步研究CDPK基因的功能,探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础.[方法]用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因,命名为Lc-CDPK;构建了羊草CDPK基因的原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,经SDS-PAGE分析CDPK蛋白的表达情况.[结果和结论]羊草CDPK基因全长cDNA序列为1 704 bp,包括1个1 647 bp的开放阅读框,编码548个氨基酸,从第81 ～339个氨基酸构成了具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域,有4个保守的EF手型结构域;编码区核苷酸序列与其他禾本科作物比对后发现,与小麦CDPK基因的相似性最高,相似度为96％;IPTG诱导表达出相对分子质量为61 350的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符.诱导7h蛋白表达量最高,表达量占菌体总蛋白的49.1％.
[目的]通過對羊草Leymus chinensis CDPK基因進行剋隆及原覈錶達,為進一步研究CDPK基因的功能,探討羊草適應生境分子機製提供理論基礎.[方法]用RT-PCR結閤RACE技術剋隆瞭羊草鈣依賴蛋白激酶(CDPK)基因,命名為Lc-CDPK;構建瞭羊草CDPK基因的原覈錶達載體,轉化到大腸埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導後,經SDS-PAGE分析CDPK蛋白的錶達情況.[結果和結論]羊草CDPK基因全長cDNA序列為1 704 bp,包括1箇1 647 bp的開放閱讀框,編碼548箇氨基痠,從第81 ～339箇氨基痠構成瞭具有絲氨痠/囌氨痠蛋白激酶催化活性的S-TKc結構域,有4箇保守的EF手型結構域;編碼區覈苷痠序列與其他禾本科作物比對後髮現,與小麥CDPK基因的相似性最高,相似度為96％;IPTG誘導錶達齣相對分子質量為61 350的融閤蛋白,錶達產物大小與預計理論值相符.誘導7h蛋白錶達量最高,錶達量佔菌體總蛋白的49.1％.
[목적]통과대양초Leymus chinensis CDPK기인진행극륭급원핵표체,위진일보연구CDPK기인적공능,탐토양초괄응생경분자궤제제공이론기출.[방법]용RT-PCR결합RACE기술극륭료양초개의뢰단백격매(CDPK)기인,명명위Lc-CDPK;구건료양초CDPK기인적원핵표체재체,전화도대장애희균Escherichia coli BL21(DE3),이병기류대반유당감(IPTG)유도후,경SDS-PAGE분석CDPK단백적표체정황.[결과화결론]양초CDPK기인전장cDNA서렬위1 704 bp,포괄1개1 647 bp적개방열독광,편마548개안기산,종제81 ～339개안기산구성료구유사안산/소안산단백격매최화활성적S-TKc결구역,유4개보수적EF수형결구역;편마구핵감산서렬여기타화본과작물비대후발현,여소맥CDPK기인적상사성최고,상사도위96％;IPTG유도표체출상대분자질량위61 350적융합단백,표체산물대소여예계이론치상부.유도7h단백표체량최고,표체량점균체총단백적49.1％.
