动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2015年
7期
47-51
,共5页
闫敏鑫%黄秀芬%任慧英%刘杉杉%姜良%李永清
閆敏鑫%黃秀芬%任慧英%劉杉杉%薑良%李永清
염민흠%황수분%임혜영%류삼삼%강량%리영청
鸡C3d%原核表达%蛋白纯化%抗血清%免疫学指标
鷄C3d%原覈錶達%蛋白純化%抗血清%免疫學指標
계C3d%원핵표체%단백순화%항혈청%면역학지표
为探讨补体因子C3d在家禽健康诊断中的意义,将鸡补体因子C3d全长基因克隆到原核表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-C3d,然后将pET28a-C3d转化到大肠埃希菌BL21 (DE3)并以IPTG诱导表达.表达产物采用氯化钾染色切胶法进行纯化,获得分子质量约35 ku的C3d目的蛋白.将所得蛋白与弗氏佐剂制备疫苗免疫小鼠,制备抗鸡补体因子C3d血清.用制备的血清与重组杆状病毒表达的C3d蛋白进行Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定血清的特异性.进一步应用该血清对不同健康状态的鸡血清进行C3d相关补体成份相对含量的检测.结果鸡补体因子C3d在大肠埃希菌中成功表达,纯化的C3d蛋白免疫小鼠后制备的抗血清经ELISA检测抗体效价达1∶256 000.Western blot和IFA结果显示,该血清能与重组杆状病毒表达的C3d蛋白发生特异性反应.临床应用试验表明,该血清不仅能用于检测不同健康状态鸡血浆中C3d的表达状况,还能用于ELISA检测不同鸡血清中C3d相关补体成分的相对含量差异.研究还证实鸡血浆中C3d相关补体成分的表达因机体免疫状态不同而存在差异,结果为了解C3d与鸡体健康状况之间的关系提供了依据.
為探討補體因子C3d在傢禽健康診斷中的意義,將鷄補體因子C3d全長基因剋隆到原覈錶達載體pET28a中構建重組錶達質粒pET28a-C3d,然後將pET28a-C3d轉化到大腸埃希菌BL21 (DE3)併以IPTG誘導錶達.錶達產物採用氯化鉀染色切膠法進行純化,穫得分子質量約35 ku的C3d目的蛋白.將所得蛋白與弗氏佐劑製備疫苗免疫小鼠,製備抗鷄補體因子C3d血清.用製備的血清與重組桿狀病毒錶達的C3d蛋白進行Western blot和間接免疫熒光(IFA)鑒定血清的特異性.進一步應用該血清對不同健康狀態的鷄血清進行C3d相關補體成份相對含量的檢測.結果鷄補體因子C3d在大腸埃希菌中成功錶達,純化的C3d蛋白免疫小鼠後製備的抗血清經ELISA檢測抗體效價達1∶256 000.Western blot和IFA結果顯示,該血清能與重組桿狀病毒錶達的C3d蛋白髮生特異性反應.臨床應用試驗錶明,該血清不僅能用于檢測不同健康狀態鷄血漿中C3d的錶達狀況,還能用于ELISA檢測不同鷄血清中C3d相關補體成分的相對含量差異.研究還證實鷄血漿中C3d相關補體成分的錶達因機體免疫狀態不同而存在差異,結果為瞭解C3d與鷄體健康狀況之間的關繫提供瞭依據.
위탐토보체인자C3d재가금건강진단중적의의,장계보체인자C3d전장기인극륭도원핵표체재체pET28a중구건중조표체질립pET28a-C3d,연후장pET28a-C3d전화도대장애희균BL21 (DE3)병이IPTG유도표체.표체산물채용록화갑염색절효법진행순화,획득분자질량약35 ku적C3d목적단백.장소득단백여불씨좌제제비역묘면역소서,제비항계보체인자C3d혈청.용제비적혈청여중조간상병독표체적C3d단백진행Western blot화간접면역형광(IFA)감정혈청적특이성.진일보응용해혈청대불동건강상태적계혈청진행C3d상관보체성빈상대함량적검측.결과계보체인자C3d재대장애희균중성공표체,순화적C3d단백면역소서후제비적항혈청경ELISA검측항체효개체1∶256 000.Western blot화IFA결과현시,해혈청능여중조간상병독표체적C3d단백발생특이성반응.림상응용시험표명,해혈청불부능용우검측불동건강상태계혈장중C3d적표체상황,환능용우ELISA검측불동계혈청중C3d상관보체성분적상대함량차이.연구환증실계혈장중C3d상관보체성분적표체인궤체면역상태불동이존재차이,결과위료해C3d여계체건강상황지간적관계제공료의거.
