宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2015年
5期
504-507,前插2
,共5页
马巧丽%刘爱翠%王妍柏%汪超%王振海
馬巧麗%劉愛翠%王妍柏%汪超%王振海
마교려%류애취%왕연백%왕초%왕진해
布鲁氏杆菌%基因omp25%载体pEGFP-N1%侧脑室注射
佈魯氏桿菌%基因omp25%載體pEGFP-N1%側腦室註射
포로씨간균%기인omp25%재체pEGFP-N1%측뇌실주사
Brucella%omp25 gene%plasmid pEGFP-N1%intracerebroventricular injection
目的 克隆布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因并构建荧光真核表达载体pEGFP-N1-omp25,检测其在大鼠脑内的表达.方法 根据Genebank中omp25基因的核苷酸序列,设计并合成1对引物,以布鲁氏杆菌总基因组DNA为模板,进行PCR扩增得到omp25基因片段,并将omp25基因片段及质粒pEGFP-N1分别进行进行酶切、体外连接,使其定向重组,构建其重组质粒.将制备的重组质粒经侧脑室注射至大鼠,检测pEGFP-N1-omp25在大鼠脑内的表达.结果 PCR扩增出642bp大小的片段,挑取的LB固体培养基上的单菌落经菌液PCR、酶切、测序表明成功构建了pEGFP-N1-omp25荧光真核表达载体.质粒经大鼠侧脑室注射后,脑组织冰冻切片可见荧光表达.结论 采用体外重组技术,成功构建了布鲁氏杆菌外膜蛋白omp25基因的真核表达载体,且重组质粒在大鼠脑组织内成功表达.
目的 剋隆佈魯氏桿菌外膜蛋白omp25基因併構建熒光真覈錶達載體pEGFP-N1-omp25,檢測其在大鼠腦內的錶達.方法 根據Genebank中omp25基因的覈苷痠序列,設計併閤成1對引物,以佈魯氏桿菌總基因組DNA為模闆,進行PCR擴增得到omp25基因片段,併將omp25基因片段及質粒pEGFP-N1分彆進行進行酶切、體外連接,使其定嚮重組,構建其重組質粒.將製備的重組質粒經側腦室註射至大鼠,檢測pEGFP-N1-omp25在大鼠腦內的錶達.結果 PCR擴增齣642bp大小的片段,挑取的LB固體培養基上的單菌落經菌液PCR、酶切、測序錶明成功構建瞭pEGFP-N1-omp25熒光真覈錶達載體.質粒經大鼠側腦室註射後,腦組織冰凍切片可見熒光錶達.結論 採用體外重組技術,成功構建瞭佈魯氏桿菌外膜蛋白omp25基因的真覈錶達載體,且重組質粒在大鼠腦組織內成功錶達.
목적 극륭포로씨간균외막단백omp25기인병구건형광진핵표체재체pEGFP-N1-omp25,검측기재대서뇌내적표체.방법 근거Genebank중omp25기인적핵감산서렬,설계병합성1대인물,이포로씨간균총기인조DNA위모판,진행PCR확증득도omp25기인편단,병장omp25기인편단급질립pEGFP-N1분별진행진행매절、체외련접,사기정향중조,구건기중조질립.장제비적중조질립경측뇌실주사지대서,검측pEGFP-N1-omp25재대서뇌내적표체.결과 PCR확증출642bp대소적편단,도취적LB고체배양기상적단균락경균액PCR、매절、측서표명성공구건료pEGFP-N1-omp25형광진핵표체재체.질립경대서측뇌실주사후,뇌조직빙동절편가견형광표체.결론 채용체외중조기술,성공구건료포로씨간균외막단백omp25기인적진핵표체재체,차중조질립재대서뇌조직내성공표체.
