动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2015年
8期
11-16,17
,共7页
郭锐%谭臣%彭忠%华琳%曾东柱%吴斌
郭銳%譚臣%彭忠%華琳%曾東柱%吳斌
곽예%담신%팽충%화림%증동주%오빈
肠出血性大肠埃希菌%分离与鉴定%多位点序列分型%序列型%进化分析
腸齣血性大腸埃希菌%分離與鑒定%多位點序列分型%序列型%進化分析
장출혈성대장애희균%분리여감정%다위점서렬분형%서렬형%진화분석
Enterohemorrhagic Escherichia coli%isolation and identification%multilocus sequence typing%sequence type%phylogenetic analysis
在牛群中分离肠出血性大肠埃希菌（EHEC），并将分离菌株与国际上流行的 EHEC株之间的亲缘关系进行比较。应用 PCR 方法结合头孢克肟-亚碲酸钾山梨醇麦康凯琼脂（CT-SMAC）平板分离法对采集的565份样本（牛粪便397份，牛奶99份，奶牛场环境中的水样69份）进行 EHEC 分离和鉴定，在此基础上，对分离的菌株进行 EHEC 相关毒力基因的检测及致 Vero 细胞毒性研究。根据大肠埃希菌 MLST 数据库（http：／／mlst．ucc．ie／mlst／mlst／dbs／E．coli）提供的多位点序列分型（MLST）方案，利用 MEGA 5．0软件分别对分离菌株进行分子分型及遗传进化分析。结果从565份样本中共分离到 EHEC 40株，占分离样本总数的7．1％（40／565）。40株 EHEC 涵盖了17种血清型，以 O157（4／40）、O26（4／40）、O91（7／40）、O100（4／40）、O97（6／40）、O92（2／40）为优势血清型。对40株 EHEC 进行相关毒力基因的检测发现，stx1、stx2、ehxA、saa 基因检出率分别为82．5％（33／40）、75％（30／40）、90％（36／40）和27．5％（11／40），远高于 eae （5％，2／40）、wzxO157（10％，4／40）基因检出率。38株携带 stx1／stx2基因的 EHEC 均能产生志贺毒素，且能致 Vero 细胞产生病变。MLST 分析表明，40株 EHEC 共有7个序列型（ST），其中 ST297为优势序列型，占57．5％（23／40）。遗传进化分析表明，ST297型与国际上流行的 EHEC 具有较近的亲缘关系。本次分离的40株 EHEC 之间具有一定的分子多态性，与国际上流行的 EHEC 具有较近的亲缘关系。除了 O157 EHEC 外，非 O157 EHEC 对人类公共卫生安全也可构成一定威胁，因此，我国应加强对这一类菌株的监测与检测。
在牛群中分離腸齣血性大腸埃希菌（EHEC），併將分離菌株與國際上流行的 EHEC株之間的親緣關繫進行比較。應用 PCR 方法結閤頭孢剋肟-亞碲痠鉀山梨醇麥康凱瓊脂（CT-SMAC）平闆分離法對採集的565份樣本（牛糞便397份，牛奶99份，奶牛場環境中的水樣69份）進行 EHEC 分離和鑒定，在此基礎上，對分離的菌株進行 EHEC 相關毒力基因的檢測及緻 Vero 細胞毒性研究。根據大腸埃希菌 MLST 數據庫（http：／／mlst．ucc．ie／mlst／mlst／dbs／E．coli）提供的多位點序列分型（MLST）方案，利用 MEGA 5．0軟件分彆對分離菌株進行分子分型及遺傳進化分析。結果從565份樣本中共分離到 EHEC 40株，佔分離樣本總數的7．1％（40／565）。40株 EHEC 涵蓋瞭17種血清型，以 O157（4／40）、O26（4／40）、O91（7／40）、O100（4／40）、O97（6／40）、O92（2／40）為優勢血清型。對40株 EHEC 進行相關毒力基因的檢測髮現，stx1、stx2、ehxA、saa 基因檢齣率分彆為82．5％（33／40）、75％（30／40）、90％（36／40）和27．5％（11／40），遠高于 eae （5％，2／40）、wzxO157（10％，4／40）基因檢齣率。38株攜帶 stx1／stx2基因的 EHEC 均能產生誌賀毒素，且能緻 Vero 細胞產生病變。MLST 分析錶明，40株 EHEC 共有7箇序列型（ST），其中 ST297為優勢序列型，佔57．5％（23／40）。遺傳進化分析錶明，ST297型與國際上流行的 EHEC 具有較近的親緣關繫。本次分離的40株 EHEC 之間具有一定的分子多態性，與國際上流行的 EHEC 具有較近的親緣關繫。除瞭 O157 EHEC 外，非 O157 EHEC 對人類公共衛生安全也可構成一定威脅，因此，我國應加彊對這一類菌株的鑑測與檢測。
재우군중분리장출혈성대장애희균（EHEC），병장분리균주여국제상류행적 EHEC주지간적친연관계진행비교。응용 PCR 방법결합두포극우-아제산갑산리순맥강개경지（CT-SMAC）평판분리법대채집적565빈양본（우분편397빈，우내99빈，내우장배경중적수양69빈）진행 EHEC 분리화감정，재차기출상，대분리적균주진행 EHEC 상관독력기인적검측급치 Vero 세포독성연구。근거대장애희균 MLST 수거고（http：／／mlst．ucc．ie／mlst／mlst／dbs／E．coli）제공적다위점서렬분형（MLST）방안，이용 MEGA 5．0연건분별대분리균주진행분자분형급유전진화분석。결과종565빈양본중공분리도 EHEC 40주，점분리양본총수적7．1％（40／565）。40주 EHEC 함개료17충혈청형，이 O157（4／40）、O26（4／40）、O91（7／40）、O100（4／40）、O97（6／40）、O92（2／40）위우세혈청형。대40주 EHEC 진행상관독력기인적검측발현，stx1、stx2、ehxA、saa 기인검출솔분별위82．5％（33／40）、75％（30／40）、90％（36／40）화27．5％（11／40），원고우 eae （5％，2／40）、wzxO157（10％，4／40）기인검출솔。38주휴대 stx1／stx2기인적 EHEC 균능산생지하독소，차능치 Vero 세포산생병변。MLST 분석표명，40주 EHEC 공유7개서렬형（ST），기중 ST297위우세서렬형，점57．5％（23／40）。유전진화분석표명，ST297형여국제상류행적 EHEC 구유교근적친연관계。본차분리적40주 EHEC 지간구유일정적분자다태성，여국제상류행적 EHEC 구유교근적친연관계。제료 O157 EHEC 외，비 O157 EHEC 대인류공공위생안전야가구성일정위협，인차，아국응가강대저일류균주적감측여검측。
To investigate the isolating rate of enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC)from cows and their phylogenetic relationships.EHEC were isolated and identified by polymerase chain reaction (PCR) and CT-SMAC separation.PCR was used to detect genes of stx1,stx2,eae,ehxA,saa,wzxO157.All i-solates were detected for the cytotoxicity in Vero cells.The isolation rate of EHEC was 7.1% (40/565). And those 40 EHEC belonged to 17 O serotypes,of which the O157 (4/40),O26 (4/40),O91 (7/40), O100 (4/40),O97 (6/40),O92 (2/40)were common serotypes.The isolation rates of stx1,stx2, ehxA,and saa were 82.5% (33/40),75% (30/40),90% (36/40),(27.5%11/40),respectively,which was higher than the other genes,e.g.eae (5%,2/40),wzxO157 (10%,4/40).All stains which carry stx1/stx2 showed cytotoxic activity in Vero cells.A total of 7 STs were identified in 40 isolates through MLST analysis,and ST297 was the common STs,was 57.5% (23/40).Phylogenetic analysis revealed a closer genetic relationship between our isolates and the EHEC strains which were epidemic in the world.It could be concluded that there exists molecular diversity among 40 EHEC,which showed genetic relation-ship with the popular EHEC worldwide.Except for EHEC O157,non-O157 EHEC strains could also threaten public health of humans,which should be monitored and detected frequently.
