CAJ | 학술논문

目的：研究不同温度对人类肽基脯氨酰顺反异构酶（ hPPI）体外交联反应的影响。方法以人总 RNA为模板设计正反引物进行hPPI基因克隆，以获取的正常型表达载体为模板，利用PCR定点突变的方法将hPPI基因中两个半胱氨酸（ Cys）突变为丝氨酸（ Ser），经异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达正常型和突变型蛋白，在不同温度条件下进行蛋白交联反应，聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）鉴定交联现象。结论与溶菌酶表现相似，正常型hPPI蛋白交联反应随温度升高而逐渐加快，在达到蛋白变性温度时交联反应最明显，出现大量二聚体和多聚体条带；将突变型hPPI蛋白置于与正常型hPPI蛋白完全相同的反应条件下，观察不到任何交联条带。结论热变性可显著改变蛋白高级结构，蛋白对热变性无明显特异性，在变性温度临界条件下表现出相同的聚合作用；二硫键可导致蛋白结构改变，从而影响交联结果。
목적：연구불동온도대인류태기포안선순반이구매（ hPPI）체외교련반응적영향。방법이인총 RNA위모판설계정반인물진행hPPI기인극륭，이획취적정상형표체재체위모판，이용PCR정점돌변적방법장hPPI기인중량개반광안산（ Cys）돌변위사안산（ Ser），경이병기류대반유당감（ IPTG）유도표체정상형화돌변형단백，재불동온도조건하진행단백교련반응，취병희선알응효전영（ SDS－PAGE）감정교련현상。결론여용균매표현상사，정상형hPPI단백교련반응수온도승고이축점가쾌，재체도단백변성온도시교련반응최명현，출현대량이취체화다취체조대；장돌변형hPPI단백치우여정상형hPPI단백완전상동적반응조건하，관찰불도임하교련조대。결론열변성가현저개변단백고급결구，단백대열변성무명현특이성，재변성온도림계조건하표현출상동적취합작용；이류건가도치단백결구개변，종이영향교련결과。