医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2015年
8期
804-808
,共5页
姚琦%李美玲%陈孟原%戴建国
姚琦%李美玲%陳孟原%戴建國
요기%리미령%진맹원%대건국
白藜芦醇%自由脂肪酸%肝细胞%凋亡%氧化应激
白藜蘆醇%自由脂肪痠%肝細胞%凋亡%氧化應激
백려호순%자유지방산%간세포%조망%양화응격
Resveratrol%Free fatty acid%Hepatocyte%Apoptosis%Oxidative stress
目的：研究表明白藜芦醇可改善非酒精性脂肪性肝病，但其作用机制尚不清楚。文中旨在观察白藜芦醇对自由脂肪酸（free fatty acids，FFAs）诱导人肝细胞L02凋亡的保护作用，探讨其可能的分子机制。方法 FFAs混合物、白藜芦醇与人肝细胞L02共同孵育，将细胞随机分为3组：对照组，自由脂肪酸组（2 mmol／L FFAs，油酸∶棕榈酸＝2∶1），白藜芦醇组（2 mmol／L FFAs＋50μmol／L白藜芦醇）。生物化学法检测肝细胞三酰甘油含量、caspase3活力、还原型谷胱甘肽（Glutathione， GSH）、丙二醛（ malondialdehyde ， MDA）含量；流式细胞术测定肝细胞凋亡情况；Western blotting测定肝细胞沉默信息调节因子1（silent information regulator 1， SIRT1）蛋白表达情况；荧光实时定量PCR检测过氧化氢酶（catalase， CAT）、锰超氧化物歧化酶（ Mn superoxidedismucase ， MnSOD）、Bcl-2、Bxa基因表达情况。结果自由脂肪酸组及白藜芦醇组肝细胞内三酰甘油含量与对照组比较，白藜芦醇组与自由脂肪酸组比较，差异均有统计学意义（ P＜0．05）。自由脂肪酸组肝细胞caspase3活力[（5．97±0．78）U／g]较对照组[（2．56±0．49）U／g]显著升高（P＜0．05）；白藜芦醇组肝细胞caspase3活力[（3．60±0．73） U／g]较自由脂肪酸组显著降低（P＜0．05）。白藜芦醇组肝细胞早凋率[（4．94±0．44）％]和晚凋率[（6．52±0．61）％]与对照组[（3．38±0．33）％、（2．75±0．19）％]及自由脂肪酸组[（6．75±0．81）％、（8．52±0．54）％]比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。自由脂肪酸组GSH含量[（73．8±13．1）nmol／g]、MDA含量[（3．77±0．92）mg／g]、SIRT1蛋白相对表达（0．61±0．07）与对照组[（113．7±13．8） nmol／g、（1．85±0．41） mg／g、（0．90±0．02）]、白藜芦醇组[（100．2±8．8） nmol／g、（2．36±0．82） mg／g、（0．84±0．04）]比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。白藜芦醇组Mn SOD、CAT、Bax基因的相对表达与对照组及自由脂肪酸组比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论白藜芦醇激活SIRT1，减轻肝细胞氧化应激，是其抑制FFAs诱发肝细胞凋亡的机制之一。
目的：研究錶明白藜蘆醇可改善非酒精性脂肪性肝病，但其作用機製尚不清楚。文中旨在觀察白藜蘆醇對自由脂肪痠（free fatty acids，FFAs）誘導人肝細胞L02凋亡的保護作用，探討其可能的分子機製。方法 FFAs混閤物、白藜蘆醇與人肝細胞L02共同孵育，將細胞隨機分為3組：對照組，自由脂肪痠組（2 mmol／L FFAs，油痠∶棕櫚痠＝2∶1），白藜蘆醇組（2 mmol／L FFAs＋50μmol／L白藜蘆醇）。生物化學法檢測肝細胞三酰甘油含量、caspase3活力、還原型穀胱甘肽（Glutathione， GSH）、丙二醛（ malondialdehyde ， MDA）含量；流式細胞術測定肝細胞凋亡情況；Western blotting測定肝細胞沉默信息調節因子1（silent information regulator 1， SIRT1）蛋白錶達情況；熒光實時定量PCR檢測過氧化氫酶（catalase， CAT）、錳超氧化物歧化酶（ Mn superoxidedismucase ， MnSOD）、Bcl-2、Bxa基因錶達情況。結果自由脂肪痠組及白藜蘆醇組肝細胞內三酰甘油含量與對照組比較，白藜蘆醇組與自由脂肪痠組比較，差異均有統計學意義（ P＜0．05）。自由脂肪痠組肝細胞caspase3活力[（5．97±0．78）U／g]較對照組[（2．56±0．49）U／g]顯著升高（P＜0．05）；白藜蘆醇組肝細胞caspase3活力[（3．60±0．73） U／g]較自由脂肪痠組顯著降低（P＜0．05）。白藜蘆醇組肝細胞早凋率[（4．94±0．44）％]和晚凋率[（6．52±0．61）％]與對照組[（3．38±0．33）％、（2．75±0．19）％]及自由脂肪痠組[（6．75±0．81）％、（8．52±0．54）％]比較，差異均有統計學意義（P＜0．05）。自由脂肪痠組GSH含量[（73．8±13．1）nmol／g]、MDA含量[（3．77±0．92）mg／g]、SIRT1蛋白相對錶達（0．61±0．07）與對照組[（113．7±13．8） nmol／g、（1．85±0．41） mg／g、（0．90±0．02）]、白藜蘆醇組[（100．2±8．8） nmol／g、（2．36±0．82） mg／g、（0．84±0．04）]比較，差異均有統計學意義（P＜0．05）。白藜蘆醇組Mn SOD、CAT、Bax基因的相對錶達與對照組及自由脂肪痠組比較，差異均有統計學意義（P＜0．05）。結論白藜蘆醇激活SIRT1，減輕肝細胞氧化應激，是其抑製FFAs誘髮肝細胞凋亡的機製之一。
목적：연구표명백려호순가개선비주정성지방성간병，단기작용궤제상불청초。문중지재관찰백려호순대자유지방산（free fatty acids，FFAs）유도인간세포L02조망적보호작용，탐토기가능적분자궤제。방법 FFAs혼합물、백려호순여인간세포L02공동부육，장세포수궤분위3조：대조조，자유지방산조（2 mmol／L FFAs，유산∶종려산＝2∶1），백려호순조（2 mmol／L FFAs＋50μmol／L백려호순）。생물화학법검측간세포삼선감유함량、caspase3활력、환원형곡광감태（Glutathione， GSH）、병이철（ malondialdehyde ， MDA）함량；류식세포술측정간세포조망정황；Western blotting측정간세포침묵신식조절인자1（silent information regulator 1， SIRT1）단백표체정황；형광실시정량PCR검측과양화경매（catalase， CAT）、맹초양화물기화매（ Mn superoxidedismucase ， MnSOD）、Bcl-2、Bxa기인표체정황。결과자유지방산조급백려호순조간세포내삼선감유함량여대조조비교，백려호순조여자유지방산조비교，차이균유통계학의의（ P＜0．05）。자유지방산조간세포caspase3활력[（5．97±0．78）U／g]교대조조[（2．56±0．49）U／g]현저승고（P＜0．05）；백려호순조간세포caspase3활력[（3．60±0．73） U／g]교자유지방산조현저강저（P＜0．05）。백려호순조간세포조조솔[（4．94±0．44）％]화만조솔[（6．52±0．61）％]여대조조[（3．38±0．33）％、（2．75±0．19）％]급자유지방산조[（6．75±0．81）％、（8．52±0．54）％]비교，차이균유통계학의의（P＜0．05）。자유지방산조GSH함량[（73．8±13．1）nmol／g]、MDA함량[（3．77±0．92）mg／g]、SIRT1단백상대표체（0．61±0．07）여대조조[（113．7±13．8） nmol／g、（1．85±0．41） mg／g、（0．90±0．02）]、백려호순조[（100．2±8．8） nmol／g、（2．36±0．82） mg／g、（0．84±0．04）]비교，차이균유통계학의의（P＜0．05）。백려호순조Mn SOD、CAT、Bax기인적상대표체여대조조급자유지방산조비교，차이균유통계학의의（P＜0．05）。결론백려호순격활SIRT1，감경간세포양화응격，시기억제FFAs유발간세포조망적궤제지일。
Objective Resveratrol can improve nonalcoholic fatty liver disease , but its action mechanisms remain unclear . This study aimed to investigate the protective effect of resveratrol against the free fatty acid ( FFA)-induced apoptosis of human hepatic L02 cells and its possible mechanisms . Methods Human hepatic L02 cells were incubated with FFA and resveratrol for 24 hours.The prepared cells were divided into a blank control , an FFA ( 2 mmol/L) , and a resveratrol group ( 50 μmol/L resveratrol +2 mmol L/FFA).After treatment, we measured the triglyceride (TG), glutathi-one (GSH), and malonaldchyde (MDA) contents and caspase3 ac-tivity in the hepatocytes , determined the apoptosis of the cells by flow cytometry , and detected the protein expression of silent information regulator 1 (SIRT1) by Western blot as well as the mRNA expressions of catalase (CAT), Mn superoxide dismucase (MnSOD), Bcl-2, and Bax by qRT-PCR. Results The TG content and caspase 3 activity in the hepatocytes were significantly increased in the FFA ([3518.±64.2] μmol/L and [5.97 ±0.78] U/g) and the resveratrol group ([201.1 ±60.1] μmol/L and [3.60 ±0.73] U/g) as compared with those of the blank control ([40.2 ±7.4] μmol/L and [2.56 ±0.49] U/g) (both P<0.05), but the caspase3 ac-tivity was markedly decreased in the resveratrol group in comparison with that of the FFA group (P<0.05).Both early and late apop-tosis rates of the hepatocytes were remarkably higher in the FFA ([6.75 ±0.81]%and [8.52 ±0.54]%) and the resveratrol group ([4.94 ±0.44]%and [6.52 ±0.61]%) than those in the blank control ([3.38 ±0.33]% and [2.72 ±0.19]%) ( both P<0.05), with statistically significant differences between the former two groups (P<0.05).The resveratrol group showed significant differences in the GSH content ([100.2 ±8.8] nmol/g), the MDA level ([2.36 ±0.82] mg/g), and the relative expression of SIRT1 (0.84 ±0.04) from the FFA group ([73.8 ±13.1] nmol/g, [3.77 ±0.92] mg/g, and 0.61 ±0.07) and the control ([113.7 ±13.8] nmol/g, [1.85 ±0.41] mg/g, and 0.90 ±0.02) (all P<0.05).The resveratrol group also exhibited statistically significant differences in the relative expressions of the MnSOD , CAT, and Bax genes from the FFA and control groups (P<0.05). Conclusion Resveratrol attenuates FFA-induced apoptosis of human hepatic L 02 cells by activating SIRT1 and reducing the oxidative stress of hepatocytes .
