应用海洋学学报
應用海洋學學報
응용해양학학보
Journal of Applied Oceanography
2015年
3期
411-418
,共8页
海洋生物学%对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒%荧光病毒样颗粒%融合蛋白%接头序列
海洋生物學%對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒%熒光病毒樣顆粒%融閤蛋白%接頭序列
해양생물학%대하전염성피하급조혈조직배사병독%형광병독양과립%융합단백%접두서렬
marine biology%infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus%fluorescence virus-like parti-cles%fusion protein%linker
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）是对虾养殖业中主要的致病病毒之一。在原核系统中表达该病毒的衣壳蛋白，发现其能够自组装成与天然病毒大小、形态相似的病毒样颗粒。本研究通过在衣壳蛋白原核表达质粒上融合表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP），并在两融合蛋白之间插入一段接头序列（linker），使自组装不受空间位阻的影响。通过原核表达纯化，成功得到 IHH-NV 的荧光病毒样颗粒（fVLPs）。电镜下观察样品具有完整的二十面体形态，免疫金标实验发现 EG-FP 成功展示在病毒样颗粒外表面。
對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒（IHHNV）是對蝦養殖業中主要的緻病病毒之一。在原覈繫統中錶達該病毒的衣殼蛋白，髮現其能夠自組裝成與天然病毒大小、形態相似的病毒樣顆粒。本研究通過在衣殼蛋白原覈錶達質粒上融閤錶達增彊型綠色熒光蛋白（EGFP），併在兩融閤蛋白之間插入一段接頭序列（linker），使自組裝不受空間位阻的影響。通過原覈錶達純化，成功得到 IHH-NV 的熒光病毒樣顆粒（fVLPs）。電鏡下觀察樣品具有完整的二十麵體形態，免疫金標實驗髮現 EG-FP 成功展示在病毒樣顆粒外錶麵。
대하전염성피하급조혈조직배사병독（IHHNV）시대하양식업중주요적치병병독지일。재원핵계통중표체해병독적의각단백，발현기능구자조장성여천연병독대소、형태상사적병독양과립。본연구통과재의각단백원핵표체질립상융합표체증강형록색형광단백（EGFP），병재량융합단백지간삽입일단접두서렬（linker），사자조장불수공간위조적영향。통과원핵표체순화，성공득도 IHH-NV 적형광병독양과립（fVLPs）。전경하관찰양품구유완정적이십면체형태，면역금표실험발현 EG-FP 성공전시재병독양과립외표면。
Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV)is one of the highly pathogenic shrimp viruses.IHHNV capsid protein (CP)can self-assemble into virus-like particles (VLPs)with similar size and shape to native virus particles when expressed in Escherichia coli.In this study,enhanced green fluorescent protein (EGFP)was fused at the N-terminus of CP with a linker sequence inserted between the two fusion proteins to avoid steric hindrance.The result demonstrates that fluorescent virus-like particles (fVLPs)of IHHNV were successfully constructed by prokaryotic expression and purification.Intact icosahedral morphology of fVLPs was observed by TEM.In addition,the immunoelectron microscopy studies show that EGFP is exposed on the surface of the fVLPs.
