中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
8期
623-627
,共5页
黄海碧%郑佳琪%王仁超%王晓晖%陈德浩%王灵芮%郭逸贤%郝永清
黃海碧%鄭佳琪%王仁超%王曉暉%陳德浩%王靈芮%郭逸賢%郝永清
황해벽%정가기%왕인초%왕효휘%진덕호%왕령예%곽일현%학영청
绵羊肺炎支原体%黏附基因%表达%抗原性分析%ELISA
綿羊肺炎支原體%黏附基因%錶達%抗原性分析%ELISA
면양폐염지원체%점부기인%표체%항원성분석%ELISA
Mycoplasma ovipneumoniae%adherence gene%expression%analysis of antigenicity%ELISA
为研究绵羊肺炎支原体(MO) P71蛋白免疫学相关功能及建立MO的快速检测方法,本研究采用PCR扩增MO P71基因片段,测序后利用生物学软件分析P71蛋白的抗原表位,选取抗原表位富集的3个基因片段P71-1(1 bp～516 bp)、P71-2 (505 bp～1 338 bp)和P71-3(1 327 bp～1 905 bp)分别克隆至原核表达载体pET-32a中进行表达.分别利用western blot和间接ELISA方法对表达产物的免疫原性、反应原性进行鉴定,以筛选的优势抗原蛋白为诊断抗原,通过对反应条件的优化,建立检测MO抗体的间接ELISA方法.结果表明:重组蛋白P71-3产生的抗体效价最高,与MO阳性血清的结合能力最强,阴阳性临界值为:OD450mm值=0.292.该方法与口蹄疫、小反刍兽疫、副结核、羊布鲁菌病、结核阳性血清均无交叉反应,具有极强的特异性.组内组间变异系数均小于10％,重复性较好.利用该方法与间接血凝试验对150份临床血清样品进行检测,结果显示,两者符合率为96.67％.本研究为进一步研制MO ELISA检测试剂盒奠定了基础.
為研究綿羊肺炎支原體(MO) P71蛋白免疫學相關功能及建立MO的快速檢測方法,本研究採用PCR擴增MO P71基因片段,測序後利用生物學軟件分析P71蛋白的抗原錶位,選取抗原錶位富集的3箇基因片段P71-1(1 bp～516 bp)、P71-2 (505 bp～1 338 bp)和P71-3(1 327 bp～1 905 bp)分彆剋隆至原覈錶達載體pET-32a中進行錶達.分彆利用western blot和間接ELISA方法對錶達產物的免疫原性、反應原性進行鑒定,以篩選的優勢抗原蛋白為診斷抗原,通過對反應條件的優化,建立檢測MO抗體的間接ELISA方法.結果錶明:重組蛋白P71-3產生的抗體效價最高,與MO暘性血清的結閤能力最彊,陰暘性臨界值為:OD450mm值=0.292.該方法與口蹄疫、小反芻獸疫、副結覈、羊佈魯菌病、結覈暘性血清均無交扠反應,具有極彊的特異性.組內組間變異繫數均小于10％,重複性較好.利用該方法與間接血凝試驗對150份臨床血清樣品進行檢測,結果顯示,兩者符閤率為96.67％.本研究為進一步研製MO ELISA檢測試劑盒奠定瞭基礎.
위연구면양폐염지원체(MO) P71단백면역학상관공능급건립MO적쾌속검측방법,본연구채용PCR확증MO P71기인편단,측서후이용생물학연건분석P71단백적항원표위,선취항원표위부집적3개기인편단P71-1(1 bp～516 bp)、P71-2 (505 bp～1 338 bp)화P71-3(1 327 bp～1 905 bp)분별극륭지원핵표체재체pET-32a중진행표체.분별이용western blot화간접ELISA방법대표체산물적면역원성、반응원성진행감정,이사선적우세항원단백위진단항원,통과대반응조건적우화,건립검측MO항체적간접ELISA방법.결과표명:중조단백P71-3산생적항체효개최고,여MO양성혈청적결합능력최강,음양성림계치위:OD450mm치=0.292.해방법여구제역、소반추수역、부결핵、양포로균병、결핵양성혈청균무교차반응,구유겁강적특이성.조내조간변이계수균소우10％,중복성교호.이용해방법여간접혈응시험대150빈림상혈청양품진행검측,결과현시,량자부합솔위96.67％.본연구위진일보연제MO ELISA검측시제합전정료기출.
