中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
8期
619-622
,共4页
李晶%时坤%曾范利%张妍%孙凡婷%刘杨%杜锐
李晶%時坤%曾範利%張妍%孫凡婷%劉楊%杜銳
리정%시곤%증범리%장연%손범정%류양%두예
水貂阿留申病毒%VP2基因%原核表达%Dot-ELISA检测
水貂阿留申病毒%VP2基因%原覈錶達%Dot-ELISA檢測
수초아류신병독%VP2기인%원핵표체%Dot-ELISA검측
Aleutian mink disease parvovirus%VP2 gene%prokaryotic expression%Dot-ELISA detection
为建立一种适合于基层快速检测水貂阿留申病毒(ADV)的检测方法,本研究将ADV的VP2基因经重叠延伸PCR法进行扩增后克隆至表达载体pGEX-4T-1中进行原核表达,将纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了ADV的Dot-ELISA检测方法,并与对流免疫电泳(CIEP)作对照试验.结果表明,抗原最适包被浓度为20 μg/mL,最适血清稀释度为1∶200,酶标二抗最适工作浓度为1∶2 000,血清和酶标抗体最适反应温度为37℃,反应时间为45 min～60 min.阻断试验和交叉试验显示与常见的貂病毒性肠炎和貂犬瘟热阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性.采用建立的Dot-ELISA和CIEP对78份临床血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA阳性检出率为84.6％,CIEP的阳性检出率为80.8％,敏感性高于CIEP,两者符合率为96.2％.本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异、重复性好,适合基层单位用于水貂阿留申病快速诊断和疫病普查.
為建立一種適閤于基層快速檢測水貂阿留申病毒(ADV)的檢測方法,本研究將ADV的VP2基因經重疊延伸PCR法進行擴增後剋隆至錶達載體pGEX-4T-1中進行原覈錶達,將純化的重組蛋白作為包被抗原建立瞭ADV的Dot-ELISA檢測方法,併與對流免疫電泳(CIEP)作對照試驗.結果錶明,抗原最適包被濃度為20 μg/mL,最適血清稀釋度為1∶200,酶標二抗最適工作濃度為1∶2 000,血清和酶標抗體最適反應溫度為37℃,反應時間為45 min～60 min.阻斷試驗和交扠試驗顯示與常見的貂病毒性腸炎和貂犬瘟熱暘性血清無交扠反應,錶明其具有良好的特異性.採用建立的Dot-ELISA和CIEP對78份臨床血清樣品進行檢測,結果顯示Dot-ELISA暘性檢齣率為84.6％,CIEP的暘性檢齣率為80.8％,敏感性高于CIEP,兩者符閤率為96.2％.本研究建立的Dot-ELISA檢測方法簡便、快速、靈敏、特異、重複性好,適閤基層單位用于水貂阿留申病快速診斷和疫病普查.
위건립일충괄합우기층쾌속검측수초아류신병독(ADV)적검측방법,본연구장ADV적VP2기인경중첩연신PCR법진행확증후극륭지표체재체pGEX-4T-1중진행원핵표체,장순화적중조단백작위포피항원건립료ADV적Dot-ELISA검측방법,병여대류면역전영(CIEP)작대조시험.결과표명,항원최괄포피농도위20 μg/mL,최괄혈청희석도위1∶200,매표이항최괄공작농도위1∶2 000,혈청화매표항체최괄반응온도위37℃,반응시간위45 min～60 min.조단시험화교차시험현시여상견적초병독성장염화초견온열양성혈청무교차반응,표명기구유량호적특이성.채용건립적Dot-ELISA화CIEP대78빈림상혈청양품진행검측,결과현시Dot-ELISA양성검출솔위84.6％,CIEP적양성검출솔위80.8％,민감성고우CIEP,량자부합솔위96.2％.본연구건립적Dot-ELISA검측방법간편、쾌속、령민、특이、중복성호,괄합기층단위용우수초아류신병쾌속진단화역병보사.
