中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2015年
8期
576-580
,共5页
邵信媛%朱鹏阳%罗维玉%赵玉辉%梁立滨%姜丽%陈化兰%胡永浩%李克生
邵信媛%硃鵬暘%囉維玉%趙玉輝%樑立濱%薑麗%陳化蘭%鬍永浩%李剋生
소신원%주붕양%라유옥%조옥휘%량립빈%강려%진화란%호영호%리극생
禽流感病毒%NS2蛋白%酵母双杂交%免疫共沉淀%宿主蛋白
禽流感病毒%NS2蛋白%酵母雙雜交%免疫共沉澱%宿主蛋白
금류감병독%NS2단백%효모쌍잡교%면역공침정%숙주단백
avian influenza virus%NS2 protein%yeast two-hybrid%Co-Immunoprecipitation%host protein
流感病毒的NS2蛋白能够介导病毒核糖核蛋白复合体(vRNP)的核输出过程,而且可以调控病毒聚合酶的活性,参与禽流感病毒在哺乳动物宿主体内的适应过程.为鉴定与NS2相互作用的宿主蛋白,本研究利用流感病毒NS2蛋白作为“诱饵”蛋白,通过经典酵母双杂交系统筛选与其相互作用的宿主蛋白,并利用免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull-down方法进一步验证其相互作用关系.结果表明,通过酵母双杂交系统筛选含有Calu-3、A549、THP-1和U251 4种细胞的cDNA文库,共筛选到7种蛋白,分别为HGS、EXOSC4、ZWINT、PRDX3、IRF3、NDUFB9和RMND5B,根据Gene Ontology分析结果表明,这些蛋白分别参与细胞生长发育、细胞代谢和细胞定位等过程.其中对过氧化物氧还酶3 (PRDX3)进行了Co-IP和GST pull-down试验证实重组表达的NS2蛋白和PRDX3蛋白在293T细胞中存在特异性的相互作用.本研究为进一步研究两者之间相互作用如何影响NS2蛋白功能以及病毒的复制周期奠定了基础.
流感病毒的NS2蛋白能夠介導病毒覈糖覈蛋白複閤體(vRNP)的覈輸齣過程,而且可以調控病毒聚閤酶的活性,參與禽流感病毒在哺乳動物宿主體內的適應過程.為鑒定與NS2相互作用的宿主蛋白,本研究利用流感病毒NS2蛋白作為“誘餌”蛋白,通過經典酵母雙雜交繫統篩選與其相互作用的宿主蛋白,併利用免疫共沉澱(Co-IP)和GST pull-down方法進一步驗證其相互作用關繫.結果錶明,通過酵母雙雜交繫統篩選含有Calu-3、A549、THP-1和U251 4種細胞的cDNA文庫,共篩選到7種蛋白,分彆為HGS、EXOSC4、ZWINT、PRDX3、IRF3、NDUFB9和RMND5B,根據Gene Ontology分析結果錶明,這些蛋白分彆參與細胞生長髮育、細胞代謝和細胞定位等過程.其中對過氧化物氧還酶3 (PRDX3)進行瞭Co-IP和GST pull-down試驗證實重組錶達的NS2蛋白和PRDX3蛋白在293T細胞中存在特異性的相互作用.本研究為進一步研究兩者之間相互作用如何影響NS2蛋白功能以及病毒的複製週期奠定瞭基礎.
류감병독적NS2단백능구개도병독핵당핵단백복합체(vRNP)적핵수출과정,이차가이조공병독취합매적활성,삼여금류감병독재포유동물숙주체내적괄응과정.위감정여NS2상호작용적숙주단백,본연구이용류감병독NS2단백작위“유이”단백,통과경전효모쌍잡교계통사선여기상호작용적숙주단백,병이용면역공침정(Co-IP)화GST pull-down방법진일보험증기상호작용관계.결과표명,통과효모쌍잡교계통사선함유Calu-3、A549、THP-1화U251 4충세포적cDNA문고,공사선도7충단백,분별위HGS、EXOSC4、ZWINT、PRDX3、IRF3、NDUFB9화RMND5B,근거Gene Ontology분석결과표명,저사단백분별삼여세포생장발육、세포대사화세포정위등과정.기중대과양화물양환매3 (PRDX3)진행료Co-IP화GST pull-down시험증실중조표체적NS2단백화PRDX3단백재293T세포중존재특이성적상호작용.본연구위진일보연구량자지간상호작용여하영향NS2단백공능이급병독적복제주기전정료기출.
