中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2015年
4期
531-537
,共7页
刘振杰%高春海%张丹丹%李涛%徐宁%李曼%黄丽英
劉振傑%高春海%張丹丹%李濤%徐寧%李曼%黃麗英
류진걸%고춘해%장단단%리도%서저%리만%황려영
prelamin A%RanBPM/RanBP9%酵母双杂交%HGPS
prelamin A%RanBPM/RanBP9%酵母雙雜交%HGPS
prelamin A%RanBPM/RanBP9%효모쌍잡교%HGPS
prelamin A%RanBPM/RanBP9%yeast two-hybrid%HGPS
[目的]筛选衰老相关蛋白prelaminA的相互作用蛋白并验证其相互作用情况.[方法]通过酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A的相互作用蛋白.一对一回复性杂交,GST pull-down,免疫共沉淀和Western blotting 验证其在细胞外的相互作用,构建RanBPM与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-N1-RanBPM,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed1-N1-prelamin A.共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察细胞内的共定位情况.[结果]筛选得到包括RanBPM在内的21个候选相互作用蛋白.一对一回复性杂交,GST pull-down,免疫共沉淀和Western blotting证明两者能在细胞外相互作用.激光共聚焦显微观察发现RanBPM能与带红色荧光蛋白的prelaminA蛋白在核膜共定位.[结论]RanBPM可能通过与Prelamin A发生相互作用参与了细胞衰老的过程.
[目的]篩選衰老相關蛋白prelaminA的相互作用蛋白併驗證其相互作用情況.[方法]通過酵母雙雜交方法從人骨骼肌cDNA文庫中篩選prelamin A的相互作用蛋白.一對一迴複性雜交,GST pull-down,免疫共沉澱和Western blotting 驗證其在細胞外的相互作用,構建RanBPM與綠色熒光蛋白融閤錶達載體pEGFP-N1-RanBPM,與紅色熒光蛋白-prelamin A融閤錶達質粒pDsRed1-N1-prelamin A.共轉染HEK293細胞,激光共聚焦顯微觀察細胞內的共定位情況.[結果]篩選得到包括RanBPM在內的21箇候選相互作用蛋白.一對一迴複性雜交,GST pull-down,免疫共沉澱和Western blotting證明兩者能在細胞外相互作用.激光共聚焦顯微觀察髮現RanBPM能與帶紅色熒光蛋白的prelaminA蛋白在覈膜共定位.[結論]RanBPM可能通過與Prelamin A髮生相互作用參與瞭細胞衰老的過程.
[목적]사선쇠로상관단백prelaminA적상호작용단백병험증기상호작용정황.[방법]통과효모쌍잡교방법종인골격기cDNA문고중사선prelamin A적상호작용단백.일대일회복성잡교,GST pull-down,면역공침정화Western blotting 험증기재세포외적상호작용,구건RanBPM여록색형광단백융합표체재체pEGFP-N1-RanBPM,여홍색형광단백-prelamin A융합표체질립pDsRed1-N1-prelamin A.공전염HEK293세포,격광공취초현미관찰세포내적공정위정황.[결과]사선득도포괄RanBPM재내적21개후선상호작용단백.일대일회복성잡교,GST pull-down,면역공침정화Western blotting증명량자능재세포외상호작용.격광공취초현미관찰발현RanBPM능여대홍색형광단백적prelaminA단백재핵막공정위.[결론]RanBPM가능통과여Prelamin A발생상호작용삼여료세포쇠로적과정.
