中国野生植物资源
中國野生植物資源
중국야생식물자원
Chinese Wild Plant Resources
2015年
4期
9-15,29
,共8页
詹羽姣%盛萍%张鹏葛%安露莎%张煊
詹羽姣%盛萍%張鵬葛%安露莎%張煊
첨우교%성평%장붕갈%안로사%장훤
贝母属%ISSP-PCR%体系优化
貝母屬%ISSP-PCR%體繫優化
패모속%ISSP-PCR%체계우화
Fritillaria L.%ISSP-PCR%reaction system optimization
目的：：建立适合新疆贝母属植物总DNA 的ISSR-PCR优化反应体系,为新疆贝母属8种药用贝母品种鉴定和遗传多样性研究提供依据。方法：综合利用单因素实验和L16(45)正交试验,对因素Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、引物浓度、模板DNA含量进行优化,并考察循环次数、延长时间及退火温度。结果：每个因素的不同水平对PCR 反应有显著影响,其中Mg2+影响最大。新疆贝母属植物总DNA的ISSR-PCR最适体系为50μL：5μL 10× Buffer、2.5 mmol/L Mg2+、0.30 mmol/L dNTPs 、0.8μmol/L引物、0.75 U Taq酶、1.0 ng/μL模板DNA、33.35μL ddH2 O。循环次数为45 cycle,延伸时间10 min,引物UBC853的最适退火温度为49.8℃。结论：建立的新疆贝母属植物总DNA的ISSR-PCR 反应体系经23份新疆贝母属8种药用贝母样品检验,ISSR-PCR扩增效果显著,证明该体系具有较高的稳定性和可重现性,为新疆贝母属8种药用贝母遗传多样性的分子标记研究奠定基础。
目的：：建立適閤新疆貝母屬植物總DNA 的ISSR-PCR優化反應體繫,為新疆貝母屬8種藥用貝母品種鑒定和遺傳多樣性研究提供依據。方法：綜閤利用單因素實驗和L16(45)正交試驗,對因素Taq DNA聚閤酶、dNTPs、Mg2+、引物濃度、模闆DNA含量進行優化,併攷察循環次數、延長時間及退火溫度。結果：每箇因素的不同水平對PCR 反應有顯著影響,其中Mg2+影響最大。新疆貝母屬植物總DNA的ISSR-PCR最適體繫為50μL：5μL 10× Buffer、2.5 mmol/L Mg2+、0.30 mmol/L dNTPs 、0.8μmol/L引物、0.75 U Taq酶、1.0 ng/μL模闆DNA、33.35μL ddH2 O。循環次數為45 cycle,延伸時間10 min,引物UBC853的最適退火溫度為49.8℃。結論：建立的新疆貝母屬植物總DNA的ISSR-PCR 反應體繫經23份新疆貝母屬8種藥用貝母樣品檢驗,ISSR-PCR擴增效果顯著,證明該體繫具有較高的穩定性和可重現性,為新疆貝母屬8種藥用貝母遺傳多樣性的分子標記研究奠定基礎。
목적：：건립괄합신강패모속식물총DNA 적ISSR-PCR우화반응체계,위신강패모속8충약용패모품충감정화유전다양성연구제공의거。방법：종합이용단인소실험화L16(45)정교시험,대인소Taq DNA취합매、dNTPs、Mg2+、인물농도、모판DNA함량진행우화,병고찰순배차수、연장시간급퇴화온도。결과：매개인소적불동수평대PCR 반응유현저영향,기중Mg2+영향최대。신강패모속식물총DNA적ISSR-PCR최괄체계위50μL：5μL 10× Buffer、2.5 mmol/L Mg2+、0.30 mmol/L dNTPs 、0.8μmol/L인물、0.75 U Taq매、1.0 ng/μL모판DNA、33.35μL ddH2 O。순배차수위45 cycle,연신시간10 min,인물UBC853적최괄퇴화온도위49.8℃。결론：건립적신강패모속식물총DNA적ISSR-PCR 반응체계경23빈신강패모속8충약용패모양품검험,ISSR-PCR확증효과현저,증명해체계구유교고적은정성화가중현성,위신강패모속8충약용패모유전다양성적분자표기연구전정기출。
Objective:To optimize the ISSR-PCR reaction system of 8 species of plants in Fritillaria L. from Xinjiang which will provide a scientific basis for identification and genetic diversity analysis. Meth-ods:Comprehensive utilization of single factor experiment and L16 (45 ) orthogonal test, the factors of Taq DNA polymerase, dNTPs, Mg2+, concentration of primers,template DNA content is optimized, and the effects of cycle number, extension of time and annealing temperature. Results: Every factor in different levels had the significant effects on the result of PCR, and the most remarkable factor was the concentra-tion of Mg2+. ISSR-PCR optimal system for total DNA of plants in Fritillaria L. from Xinjiang as the 50μl:5 μl 10 × Buffer, 2. 5 mmol/L Mg2+, 0. 30 mmol/L dNTPs, 0. 8 μmol/L primer, 0. 75 U Taq DNA polymerase, 1. 0 ng/μl template DNA, 33. 35 μl ddH2 O. The cycle times of 45 cycle, extended time of 10 min, the suitable annealing temperature of primer UBC853 was 49. 8℃. Conclusion:The established and optimized ISSR reaction system is stable and credible and ISSR-PCR amplification effect is obvious according to the testing results of 23 samples of 8 species of plants in Fritillaria L. from Xinjiang, and lay the foundation for the study of molecular markers of genetic diversity in 8 species of plants in Fritillar-ia L. from Xinjiang.
