复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2015年
4期
435-443,450
,共10页
巩微%徐海鸣%孙昶%徐彦辉%李泽%王平
鞏微%徐海鳴%孫昶%徐彥輝%李澤%王平
공미%서해명%손창%서언휘%리택%왕평
NF2%磷酸化%晶体结构%开放构象%闭合构象
NF2%燐痠化%晶體結構%開放構象%閉閤構象
NF2%린산화%정체결구%개방구상%폐합구상
NF2%phosphorylation%crystal structure%open form%closed form
目的 揭示NF2 (neurofibromatosis type 2)蛋白518位丝氨酸的磷酸化如何对其结构与功能进行调节.方法 解析野生型NF2wT(无模拟磷酸化突变)和突变型NF2S518D(模拟518位丝氨酸被磷酸化的突变体)蛋白的晶体结构,进一步利用体外Pull-down实验及荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)实验检测了NF2的分子内相互作用.结果 由于NF2的C-端在结晶过程中降解,未能观察到NF2wT和NF2ss18D两种蛋白质构象的差异,结构分析发现NF2的N-端FERM (Four-point one,Ezrin,Radixin,Moesin)结构域与已有结构报道的FERM结构域具有相似的空间构象.体外Pull-down实验证明生化实验结果提示,相对NF2wTC-端蛋白质而言,NF2S518D的C-端蛋白质与NF2的N-端蛋白质结合更强.FRET实验在波长525 nm处,检测到全长NF2S518D比全长NF2wT产生更强的FRET信号.结论 野生型NF2wT处于“开放”状态而模拟磷酸化的突变型NF2S518D处于“闭合”状态.
目的 揭示NF2 (neurofibromatosis type 2)蛋白518位絲氨痠的燐痠化如何對其結構與功能進行調節.方法 解析野生型NF2wT(無模擬燐痠化突變)和突變型NF2S518D(模擬518位絲氨痠被燐痠化的突變體)蛋白的晶體結構,進一步利用體外Pull-down實驗及熒光共振能量轉移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)實驗檢測瞭NF2的分子內相互作用.結果 由于NF2的C-耑在結晶過程中降解,未能觀察到NF2wT和NF2ss18D兩種蛋白質構象的差異,結構分析髮現NF2的N-耑FERM (Four-point one,Ezrin,Radixin,Moesin)結構域與已有結構報道的FERM結構域具有相似的空間構象.體外Pull-down實驗證明生化實驗結果提示,相對NF2wTC-耑蛋白質而言,NF2S518D的C-耑蛋白質與NF2的N-耑蛋白質結閤更彊.FRET實驗在波長525 nm處,檢測到全長NF2S518D比全長NF2wT產生更彊的FRET信號.結論 野生型NF2wT處于“開放”狀態而模擬燐痠化的突變型NF2S518D處于“閉閤”狀態.
목적 게시NF2 (neurofibromatosis type 2)단백518위사안산적린산화여하대기결구여공능진행조절.방법 해석야생형NF2wT(무모의린산화돌변)화돌변형NF2S518D(모의518위사안산피린산화적돌변체)단백적정체결구,진일보이용체외Pull-down실험급형광공진능량전이(fluorescence resonance energy transfer,FRET)실험검측료NF2적분자내상호작용.결과 유우NF2적C-단재결정과정중강해,미능관찰도NF2wT화NF2ss18D량충단백질구상적차이,결구분석발현NF2적N-단FERM (Four-point one,Ezrin,Radixin,Moesin)결구역여이유결구보도적FERM결구역구유상사적공간구상.체외Pull-down실험증명생화실험결과제시,상대NF2wTC-단단백질이언,NF2S518D적C-단단백질여NF2적N-단단백질결합경강.FRET실험재파장525 nm처,검측도전장NF2S518D비전장NF2wT산생경강적FRET신호.결론 야생형NF2wT처우“개방”상태이모의린산화적돌변형NF2S518D처우“폐합”상태.
