食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2015年
13期
178-183
,共6页
王丹%傅婷%万骥%唐云明
王丹%傅婷%萬驥%唐雲明
왕단%부정%만기%당운명
牛肝%谷氨酸脱氢酶%分离纯化%酶学性质
牛肝%穀氨痠脫氫酶%分離純化%酶學性質
우간%곡안산탈경매%분리순화%매학성질
bovine liver%glutamate dehydrogenase%isolation and purification%enzymatic properties
取新鲜牛肝,经匀浆、缓冲液抽提、正丁醇脱脂、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化,获得了电泳纯的牛肝谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH).经过纯化后的结果:GDH的酶比活力为306.06 U/mg,纯化倍数为93.60倍,酶活回收率为23.12%.GDH的分子质量为380.2 kD,亚基分子质量约为61.7 kD.酶学性质研究结果表明:GDH的最适反应温度为50℃,在温度为30℃以下时较稳定;最适反应pH值为8.2,该酶对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)的Km值为0.696 mmol/L.甲醇、乙醇、异丙醇、Cd2+、C02+、Ca2+、Ag+、Pb2+、Zn2+、Cu2+对该酶具有抑制作用,低浓度Ba2+、Mg2+、K+、Li+与乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)对其具有一定的激活作用.
取新鮮牛肝,經勻漿、緩遲液抽提、正丁醇脫脂、硫痠銨分級沉澱、DEAE-Sepharose離子交換層析、Superdex-200凝膠過濾層析等方法純化,穫得瞭電泳純的牛肝穀氨痠脫氫酶(glutamate dehydrogenase,GDH).經過純化後的結果:GDH的酶比活力為306.06 U/mg,純化倍數為93.60倍,酶活迴收率為23.12%.GDH的分子質量為380.2 kD,亞基分子質量約為61.7 kD.酶學性質研究結果錶明:GDH的最適反應溫度為50℃,在溫度為30℃以下時較穩定;最適反應pH值為8.2,該酶對煙酰胺腺嘌呤二覈苷痠(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)的Km值為0.696 mmol/L.甲醇、乙醇、異丙醇、Cd2+、C02+、Ca2+、Ag+、Pb2+、Zn2+、Cu2+對該酶具有抑製作用,低濃度Ba2+、Mg2+、K+、Li+與乙二胺四乙痠(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)對其具有一定的激活作用.
취신선우간,경균장、완충액추제、정정순탈지、류산안분급침정、DEAE-Sepharose리자교환층석、Superdex-200응효과려층석등방법순화,획득료전영순적우간곡안산탈경매(glutamate dehydrogenase,GDH).경과순화후적결과:GDH적매비활력위306.06 U/mg,순화배수위93.60배,매활회수솔위23.12%.GDH적분자질량위380.2 kD,아기분자질량약위61.7 kD.매학성질연구결과표명:GDH적최괄반응온도위50℃,재온도위30℃이하시교은정;최괄반응pH치위8.2,해매대연선알선표령이핵감산(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)적Km치위0.696 mmol/L.갑순、을순、이병순、Cd2+、C02+、Ca2+、Ag+、Pb2+、Zn2+、Cu2+대해매구유억제작용,저농도Ba2+、Mg2+、K+、Li+여을이알사을산(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)대기구유일정적격활작용.