云南农业大学学报（自然科学）
雲南農業大學學報（自然科學）
운남농업대학학보（자연과학）
Journal of Yunnan Agricultural University
2015年
4期
588-593
,共6页
潘洪彬%孙泽威%李春雨%赵素梅%黄英%杨明华%高士争%秦贵信
潘洪彬%孫澤威%李春雨%趙素梅%黃英%楊明華%高士爭%秦貴信
반홍빈%손택위%리춘우%조소매%황영%양명화%고사쟁%진귀신
猪%FSP27基因%过表达%3T3-L1细胞系
豬%FSP27基因%過錶達%3T3-L1細胞繫
저%FSP27기인%과표체%3T3-L1세포계
pigs%FSP27 gene%overexpression%3T3-L1 cell line
脂肪特异蛋白27 (FSP27)是一种新发现的定位在脂滴的蛋白质,在调控脂肪细胞内脂类贮存等方面起着重要作用.本试验用含有猪FSP27基因的慢病毒,感染鼠3T3-L1前脂肪细胞,建立猪FSP27基因过表达的前脂肪细胞系,为进一步研究猪FSP27基因在脂肪细胞中调控脂类代谢提供实验素材.根据猪的FSP27基因序列设计目的基因引物序列,并分别添加酶切位点NheI和AgeI及保护碱基,克隆到pMD18-T载体做NheI和AgeI双酶切,将酶切产物回收并将双酶切后的目的片段与GV341载体连接,转入293T细胞,包装成慢病毒,收集、浓缩、纯化病毒上清并用来感染3T3-L1前脂肪细胞,筛选稳定系,并检测感染效率和脂肪细胞表型变化.结果显示,猪FSP27基因过表达3T3-L1脂肪细胞中FSP27基因的相对表达量显著高于对照组(P＜0.01),在过表达脂肪细胞培养第8天,脂肪细胞形成脂滴数量明显多于对照组(P＜0.05),表明猪FSP27基因过表达3T3-L1脂肪细胞系构建成功.
脂肪特異蛋白27 (FSP27)是一種新髮現的定位在脂滴的蛋白質,在調控脂肪細胞內脂類貯存等方麵起著重要作用.本試驗用含有豬FSP27基因的慢病毒,感染鼠3T3-L1前脂肪細胞,建立豬FSP27基因過錶達的前脂肪細胞繫,為進一步研究豬FSP27基因在脂肪細胞中調控脂類代謝提供實驗素材.根據豬的FSP27基因序列設計目的基因引物序列,併分彆添加酶切位點NheI和AgeI及保護堿基,剋隆到pMD18-T載體做NheI和AgeI雙酶切,將酶切產物迴收併將雙酶切後的目的片段與GV341載體連接,轉入293T細胞,包裝成慢病毒,收集、濃縮、純化病毒上清併用來感染3T3-L1前脂肪細胞,篩選穩定繫,併檢測感染效率和脂肪細胞錶型變化.結果顯示,豬FSP27基因過錶達3T3-L1脂肪細胞中FSP27基因的相對錶達量顯著高于對照組(P＜0.01),在過錶達脂肪細胞培養第8天,脂肪細胞形成脂滴數量明顯多于對照組(P＜0.05),錶明豬FSP27基因過錶達3T3-L1脂肪細胞繫構建成功.
지방특이단백27 (FSP27)시일충신발현적정위재지적적단백질,재조공지방세포내지류저존등방면기착중요작용.본시험용함유저FSP27기인적만병독,감염서3T3-L1전지방세포,건립저FSP27기인과표체적전지방세포계,위진일보연구저FSP27기인재지방세포중조공지류대사제공실험소재.근거저적FSP27기인서렬설계목적기인인물서렬,병분별첨가매절위점NheI화AgeI급보호감기,극륭도pMD18-T재체주NheI화AgeI쌍매절,장매절산물회수병장쌍매절후적목적편단여GV341재체련접,전입293T세포,포장성만병독,수집、농축、순화병독상청병용래감염3T3-L1전지방세포,사선은정계,병검측감염효솔화지방세포표형변화.결과현시,저FSP27기인과표체3T3-L1지방세포중FSP27기인적상대표체량현저고우대조조(P＜0.01),재과표체지방세포배양제8천,지방세포형성지적수량명현다우대조조(P＜0.05),표명저FSP27기인과표체3T3-L1지방세포계구건성공.
