医药导报
醫藥導報
의약도보
HERALD OF MEDICINE
2015年
9期
1142-1145
,共4页
徐元萍%高凌%宋晓晖%周倩
徐元萍%高凌%宋曉暉%週倩
서원평%고릉%송효휘%주천
雌二醇%内皮细胞%一氧化氮%一氧化氮合成酶
雌二醇%內皮細胞%一氧化氮%一氧化氮閤成酶
자이순%내피세포%일양화담%일양화담합성매
Estradiol%Endothelial cells%Nitric oxide%Nitric oxide synthase
目的：观察17β-雌二醇(E2)诱导小牛胸主动脉内皮细胞(BAECs)快速激活并释放一氧化氮(NO)的时间和浓度依赖性趋势。方法采用24孔平底细胞培养板培养 BAECs 分别进行实验,观察不同浓度 E2诱导 BAECs 快速激活并释放 NO 的浓度依赖性趋势及非基因组机制通路。每次实验均重复3次。使用电子自旋共振波谱法定量测定 NO 的释放；蛋白免疫印迹法检测 BAECs 一氧化氮合成酶(eNOS)磷酸化的水平。结果终浓度为100 nmol?L－1的 E2分别处理 BAECs 1,5,10和15 min 后,NO 的释放量呈现时间依赖性,在10 min 达到高峰；培养液中加入不同终浓度的 E2分别处理 BAECs 10 min后,NO 的释放量和 eNOS 的磷酸化均显示有剂量依赖性,并在终浓度为100 nmol?L－1时达到高峰；培养液中分别加入等体积0.9％氯化钠溶液、100 nmol?L－1 E2和25μg?mL－1放线菌素 D(Act-D)处理 BAECs 10 min 后,NO 释放量分别为(5.38±2.35),(10.59±3.28)和(10.68±3.31) nmol?mg－1；eNOS 的磷酸化水平分别为0.36±0.03,0.98±0.08和0.99±0.08；与经0.9％氯化钠溶液处理比较,经100 nmol?L－1 E2处理后,BAECs 的 NO 释放量和 eNOS 的磷酸化水平均显著增加(均 P<0.05)。结论终浓度为100 nmol?L－1 E2可以通过非基因组机制快速激活血管内皮细胞中 eNOS 的磷酸化水平,进而可以快速合成和释放 NO 发挥其生物学作用,10 min 即可使此效应达到峰值。
目的：觀察17β-雌二醇(E2)誘導小牛胸主動脈內皮細胞(BAECs)快速激活併釋放一氧化氮(NO)的時間和濃度依賴性趨勢。方法採用24孔平底細胞培養闆培養 BAECs 分彆進行實驗,觀察不同濃度 E2誘導 BAECs 快速激活併釋放 NO 的濃度依賴性趨勢及非基因組機製通路。每次實驗均重複3次。使用電子自鏇共振波譜法定量測定 NO 的釋放；蛋白免疫印跡法檢測 BAECs 一氧化氮閤成酶(eNOS)燐痠化的水平。結果終濃度為100 nmol?L－1的 E2分彆處理 BAECs 1,5,10和15 min 後,NO 的釋放量呈現時間依賴性,在10 min 達到高峰；培養液中加入不同終濃度的 E2分彆處理 BAECs 10 min後,NO 的釋放量和 eNOS 的燐痠化均顯示有劑量依賴性,併在終濃度為100 nmol?L－1時達到高峰；培養液中分彆加入等體積0.9％氯化鈉溶液、100 nmol?L－1 E2和25μg?mL－1放線菌素 D(Act-D)處理 BAECs 10 min 後,NO 釋放量分彆為(5.38±2.35),(10.59±3.28)和(10.68±3.31) nmol?mg－1；eNOS 的燐痠化水平分彆為0.36±0.03,0.98±0.08和0.99±0.08；與經0.9％氯化鈉溶液處理比較,經100 nmol?L－1 E2處理後,BAECs 的 NO 釋放量和 eNOS 的燐痠化水平均顯著增加(均 P<0.05)。結論終濃度為100 nmol?L－1 E2可以通過非基因組機製快速激活血管內皮細胞中 eNOS 的燐痠化水平,進而可以快速閤成和釋放 NO 髮揮其生物學作用,10 min 即可使此效應達到峰值。
목적：관찰17β-자이순(E2)유도소우흉주동맥내피세포(BAECs)쾌속격활병석방일양화담(NO)적시간화농도의뢰성추세。방법채용24공평저세포배양판배양 BAECs 분별진행실험,관찰불동농도 E2유도 BAECs 쾌속격활병석방 NO 적농도의뢰성추세급비기인조궤제통로。매차실험균중복3차。사용전자자선공진파보법정량측정 NO 적석방；단백면역인적법검측 BAECs 일양화담합성매(eNOS)린산화적수평。결과종농도위100 nmol?L－1적 E2분별처리 BAECs 1,5,10화15 min 후,NO 적석방량정현시간의뢰성,재10 min 체도고봉；배양액중가입불동종농도적 E2분별처리 BAECs 10 min후,NO 적석방량화 eNOS 적린산화균현시유제량의뢰성,병재종농도위100 nmol?L－1시체도고봉；배양액중분별가입등체적0.9％록화납용액、100 nmol?L－1 E2화25μg?mL－1방선균소 D(Act-D)처리 BAECs 10 min 후,NO 석방량분별위(5.38±2.35),(10.59±3.28)화(10.68±3.31) nmol?mg－1；eNOS 적린산화수평분별위0.36±0.03,0.98±0.08화0.99±0.08；여경0.9％록화납용액처리비교,경100 nmol?L－1 E2처리후,BAECs 적 NO 석방량화 eNOS 적린산화수평균현저증가(균 P<0.05)。결론종농도위100 nmol?L－1 E2가이통과비기인조궤제쾌속격활혈관내피세포중 eNOS 적린산화수평,진이가이쾌속합성화석방 NO 발휘기생물학작용,10 min 즉가사차효응체도봉치。
Objective To investigate the time and dose dependent effects of 17 β-estradiol ( E2 ) on eNOS phosphorylation and nitric oxide (NO) production from bovine aortic endothelial cells (BAECs). Methods The BAECs were cultured in 24-well flat plate.The dose dependent rapid induction of NO release by E2 in the BAECs was explored,and the non-genomic mechanism was studied. Each experiment was repeated for 3 times. The NO level was quantified by the electron spin resonance spectroscopy(ESR)method,and the phosphorylation of eNOS were determined by Western blot. Results NO release increased time dependently from BAECs after treatment with E2 at 100 nmol?L-1 at 1,5,10 and 15 min,and the effect peaked at 10 min.There were dose dependent effects of NO production as well as eNOS phosphorylation after treatment with E2 at different concentrations for 10 min,and the effect was the most obvious at the concentration of 100 nmol?L-1 .Upon treatment with equal volume of saline,E2 and actinomycin D (25 μg?mL-1 ) for 10 min,the NO release was(5.38±2.35),(10.59±3.28)and(10.68± 3.31) nmol?mg-1 ,respectively,and the eNOS phosphorylation level was 0.36±0.03,0.98±0.08 and 0.99±0.08,respectively. Compared with 0.9% sodium chloride solution,the NO release and eNOS phosphorylation were significantly increased in E2 treated cells(all P<0.05). Conclusion 17 β-estradiol at 100 nmol?L-1 induced eNOS phosphorylation as well as NO production from bovine vascular endothelial cells through non-genomic mechanism.The effect peaked at 10 minutes.
