医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2015年
9期
915-919
,共5页
何小静%王彦洁%王宇%杨欣%李晓冬
何小靜%王彥潔%王宇%楊訢%李曉鼕
하소정%왕언길%왕우%양흔%리효동
雌激素%内质网应激%人脐静脉血管内皮细胞%细胞凋亡%动脉粥样硬化
雌激素%內質網應激%人臍靜脈血管內皮細胞%細胞凋亡%動脈粥樣硬化
자격소%내질망응격%인제정맥혈관내피세포%세포조망%동맥죽양경화
Estrogen%Endoplasmic reticulum stress%Human umbilical vein endothelial cells%Cell apoptosis%Atherosclerosis
目的：目前认为内质网是心血管疾病治疗的新靶点，其应激反应在高血压心血管重塑中具有重要作用。文中通过建立衣霉素及二硫苏糖醇诱导人脐静脉血管内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells， HUVECs）内质网应激（ endo-plasmic reticulum stress， ERS）凋亡模型，探讨17-β雌二醇对衣霉素／二硫苏糖醇诱导HUVECs ERS凋亡的影响。方法实验前期已确定10μmol／L衣霉素处理细胞10 h或2 mmol／L二硫苏糖醇处理细胞8 h为诱导细胞ERS凋亡最佳浓度和时间。浓度为10－8 mol／L的17-β雌二醇对ERS的保护作用最明显。根据是否用衣霉素／二硫苏糖醇，17-β雌二醇，雌激素受体拮抗剂（ ICI182，780和G15）处理进行如下分组：①空白对照A、B组；②衣霉素／二硫苏糖醇组；③衣霉素／二硫苏糖醇＋17-β雌二醇组；④衣霉素／二硫苏糖醇＋17-β雌二醇＋ICI组；⑤衣霉素／二硫苏糖醇＋17-β雌二醇＋G15组；⑥衣霉素／二硫苏糖醇＋17-β雌二醇＋ICI ＋G15组。 Western blot 检测ERS 诱导凋亡的标志分子 GRP78、剪切的 caspase 12及 CHOP 的表达，及Hochest染色检测凋亡细胞数的变化。结果与空白对照A、B组比较，衣霉素／二硫苏糖醇组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高（P＜0．05）；与衣霉素组比较，衣霉素＋17-β雌二醇组GRP78、caspase-12和CHOP的表达均下降（6．80±1．07 vs 4．01±0．46，1．54±0．32 vs 0．88±0．10，1．91±0．37 vs 0．91±0．02， P＜0．05）；与衣霉素＋17-β雌二醇组比较，衣霉素＋17-β雌二醇＋ICI组CHOP表达升高（0．91±0．02 vs 0．96±0．02， P＜0．05），衣霉素＋17-β雌二醇＋G15组GRP78、caspase-12表达升高（4．01±0．46 vs 5．25±0．80，0．88±0．10 vs 1．02±0．07， P＜0．05），衣霉素＋17-β雌二醇＋ICI＋G15组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高（ P＜0．05）。与二硫苏糖醇组比较，二硫苏糖醇＋17-β雌二醇组GRP78和CHOP表达均下降（1．81±0．08 vs 1．30±0．14，1．00±0．13 vs 0．51±0．01， P＜0．05）；与二硫苏糖醇＋17-β雌二醇组比较，二硫苏糖醇＋17-β雌二醇＋ICI组GRP78和CHOP的表达下降（P＜0．05），二硫苏糖醇＋17-β雌二醇＋G15组GRP78表达升高（P＜0．05），二硫苏糖醇＋17-β雌二醇＋ICI＋G15组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高（ P＜0．05）。 Hochest染色检测细胞凋亡数目的变化与Western blot 的结果一致。结论17-β雌二醇可抑制衣霉素／二硫苏糖醇诱导的人脐静脉内皮细胞ERS引起的凋亡，雌激素通过调节雌激素受体保持ERS的稳态，进而保护心血管。
目的：目前認為內質網是心血管疾病治療的新靶點，其應激反應在高血壓心血管重塑中具有重要作用。文中通過建立衣黴素及二硫囌糖醇誘導人臍靜脈血管內皮細胞（ human umbilical vein endothelial cells， HUVECs）內質網應激（ endo-plasmic reticulum stress， ERS）凋亡模型，探討17-β雌二醇對衣黴素／二硫囌糖醇誘導HUVECs ERS凋亡的影響。方法實驗前期已確定10μmol／L衣黴素處理細胞10 h或2 mmol／L二硫囌糖醇處理細胞8 h為誘導細胞ERS凋亡最佳濃度和時間。濃度為10－8 mol／L的17-β雌二醇對ERS的保護作用最明顯。根據是否用衣黴素／二硫囌糖醇，17-β雌二醇，雌激素受體拮抗劑（ ICI182，780和G15）處理進行如下分組：①空白對照A、B組；②衣黴素／二硫囌糖醇組；③衣黴素／二硫囌糖醇＋17-β雌二醇組；④衣黴素／二硫囌糖醇＋17-β雌二醇＋ICI組；⑤衣黴素／二硫囌糖醇＋17-β雌二醇＋G15組；⑥衣黴素／二硫囌糖醇＋17-β雌二醇＋ICI ＋G15組。 Western blot 檢測ERS 誘導凋亡的標誌分子 GRP78、剪切的 caspase 12及 CHOP 的錶達，及Hochest染色檢測凋亡細胞數的變化。結果與空白對照A、B組比較，衣黴素／二硫囌糖醇組GRP78、caspase-12和CHOP的錶達升高（P＜0．05）；與衣黴素組比較，衣黴素＋17-β雌二醇組GRP78、caspase-12和CHOP的錶達均下降（6．80±1．07 vs 4．01±0．46，1．54±0．32 vs 0．88±0．10，1．91±0．37 vs 0．91±0．02， P＜0．05）；與衣黴素＋17-β雌二醇組比較，衣黴素＋17-β雌二醇＋ICI組CHOP錶達升高（0．91±0．02 vs 0．96±0．02， P＜0．05），衣黴素＋17-β雌二醇＋G15組GRP78、caspase-12錶達升高（4．01±0．46 vs 5．25±0．80，0．88±0．10 vs 1．02±0．07， P＜0．05），衣黴素＋17-β雌二醇＋ICI＋G15組GRP78、caspase-12和CHOP的錶達升高（ P＜0．05）。與二硫囌糖醇組比較，二硫囌糖醇＋17-β雌二醇組GRP78和CHOP錶達均下降（1．81±0．08 vs 1．30±0．14，1．00±0．13 vs 0．51±0．01， P＜0．05）；與二硫囌糖醇＋17-β雌二醇組比較，二硫囌糖醇＋17-β雌二醇＋ICI組GRP78和CHOP的錶達下降（P＜0．05），二硫囌糖醇＋17-β雌二醇＋G15組GRP78錶達升高（P＜0．05），二硫囌糖醇＋17-β雌二醇＋ICI＋G15組GRP78、caspase-12和CHOP的錶達升高（ P＜0．05）。 Hochest染色檢測細胞凋亡數目的變化與Western blot 的結果一緻。結論17-β雌二醇可抑製衣黴素／二硫囌糖醇誘導的人臍靜脈內皮細胞ERS引起的凋亡，雌激素通過調節雌激素受體保持ERS的穩態，進而保護心血管。
목적：목전인위내질망시심혈관질병치료적신파점，기응격반응재고혈압심혈관중소중구유중요작용。문중통과건립의매소급이류소당순유도인제정맥혈관내피세포（ human umbilical vein endothelial cells， HUVECs）내질망응격（ endo-plasmic reticulum stress， ERS）조망모형，탐토17-β자이순대의매소／이류소당순유도HUVECs ERS조망적영향。방법실험전기이학정10μmol／L의매소처리세포10 h혹2 mmol／L이류소당순처리세포8 h위유도세포ERS조망최가농도화시간。농도위10－8 mol／L적17-β자이순대ERS적보호작용최명현。근거시부용의매소／이류소당순，17-β자이순，자격소수체길항제（ ICI182，780화G15）처리진행여하분조：①공백대조A、B조；②의매소／이류소당순조；③의매소／이류소당순＋17-β자이순조；④의매소／이류소당순＋17-β자이순＋ICI조；⑤의매소／이류소당순＋17-β자이순＋G15조；⑥의매소／이류소당순＋17-β자이순＋ICI ＋G15조。 Western blot 검측ERS 유도조망적표지분자 GRP78、전절적 caspase 12급 CHOP 적표체，급Hochest염색검측조망세포수적변화。결과여공백대조A、B조비교，의매소／이류소당순조GRP78、caspase-12화CHOP적표체승고（P＜0．05）；여의매소조비교，의매소＋17-β자이순조GRP78、caspase-12화CHOP적표체균하강（6．80±1．07 vs 4．01±0．46，1．54±0．32 vs 0．88±0．10，1．91±0．37 vs 0．91±0．02， P＜0．05）；여의매소＋17-β자이순조비교，의매소＋17-β자이순＋ICI조CHOP표체승고（0．91±0．02 vs 0．96±0．02， P＜0．05），의매소＋17-β자이순＋G15조GRP78、caspase-12표체승고（4．01±0．46 vs 5．25±0．80，0．88±0．10 vs 1．02±0．07， P＜0．05），의매소＋17-β자이순＋ICI＋G15조GRP78、caspase-12화CHOP적표체승고（ P＜0．05）。여이류소당순조비교，이류소당순＋17-β자이순조GRP78화CHOP표체균하강（1．81±0．08 vs 1．30±0．14，1．00±0．13 vs 0．51±0．01， P＜0．05）；여이류소당순＋17-β자이순조비교，이류소당순＋17-β자이순＋ICI조GRP78화CHOP적표체하강（P＜0．05），이류소당순＋17-β자이순＋G15조GRP78표체승고（P＜0．05），이류소당순＋17-β자이순＋ICI＋G15조GRP78、caspase-12화CHOP적표체승고（ P＜0．05）。 Hochest염색검측세포조망수목적변화여Western blot 적결과일치。결론17-β자이순가억제의매소／이류소당순유도적인제정맥내피세포ERS인기적조망，자격소통과조절자격소수체보지ERS적은태，진이보호심혈관。
Objective Recent researches find that endoplasmic reticulum is a new target for the treatment of cardiovascular disease and its stress response plays an important role in the hypertension-induced cardiovascular remodeling.The study built up the apoptosis model of endoplasmic reticulum stress ( ERS) in human umbilical vein endothelial cells ( HUVECs) and investigated the im-pact of 17β-estradiol ( E2) on the ERS apoptosis of HUVECs induced by tunicamycinand(TM)/dithiothreitol(DTT). Methods HUVECs incubated for 10 h in 10μmol/L TM or 8 h in 2 mmol/L DTT were the best concentration and time for ERS apoptosis.E2 of 10-8 mol/L was prominent in protecting ERS.According to the application of TM/DTT, E2, estrogen antagonists (ICI182, 780 and G15), there were 6 groups:control group, TM/DTT group, TM/DTT+E2 group, TM/DTT+E2 +G15 group, TM/DTT+E2 +ICI+G15 group.Western blot was applied to detect the expressions of biomarkers for ERS in-duced apoptosis (GRP78, cleaved caspase-12 and CHOP).Hochest staining was used to observe the changes of the apoptosis cell number. Results Compared with control group, the expressions of GRP78, caspase-12 and CHOP significantly increased(P<0.05).In comparison with TM group, the expressions of GRP78, caspase-12 and CHOP in TM+E2 group significantly decreased (6.80 ±1.07 vs 4.01 ±0.46, 1.54 ±0.32 vs 0.88 ±0.10, 1.91 ±0.37 vs 0.91 ± 0.02, P<0.05).In comparison with TM +E2 group, the CHOP expression in TM +E2 +ICI group increased(0.91 ±0.02 vs 0.96 ±0.02, P<0.05), and the expressions of GRP78 and caspase-12 in TM+E2 +G15 group increased(4.01 ±0.46 vs 5.25 ± 0.80, 0.88 ±0.10 vs 1.02 ±0.07, P<0.05), and the expressions of GRP78, caspase-12 and CHOP in TM+E2 +ICI+G15 group increased (P<0.05).Compared with DTT group, the expressions of GRP78 and CHOP in DTT+E2 group decreased (1.81 ± 0.08 vs 1.30 ±0.14, 1.00 ±0.13 vs 0.51 ±0.01, P<0.05).In comparison with DTT+E2 group, the expressions of GRP78 and CHOP in DTT+E2 +ICI group decreased(P <0.05), and the expression of GPR78 in DTT+E2 +G15 group increased(P<0.05), and the expressions of GRP78, caspase-12 and CHOP in DTT+E2 +ICI+G15 group increased(P<0.05).The change of the apop-tosis cell number observed by hochest staining was in consistence with the result of western blot. Conclusion E2 can protect human endothelial cells from ERS induced apoptosis caused by TM and DTT.Estrogen maintains homeostasis by regulating ERS estrogen re-ceptors, thereby protecting the cardiovascular system.
