体育科学
體育科學
체육과학
China Sport Science
2014年
5期
3~8
,共null页
龚丽景 胡扬 李燕春 梅涛
龔麗景 鬍颺 李燕春 梅濤
공려경 호양 리연춘 매도
基因多态性 线粒体基因 基因表达 D-Loop区 质粒转染
基因多態性 線粒體基因 基因錶達 D-Loop區 質粒轉染
기인다태성 선립체기인 기인표체 D-Loop구 질립전염
gene polymorphisms ; mitochondrial DNA ; gene expression ; D-Loop region ; plasmid transfection
Case-Control研究表明，人线粒体基因（mtDNA）D-Loop区mt235、mt514—515、natl6183、mtl6290和mtl6319多态位点与有氧运动能力有关。拟从下游基因表达做进一步的研究，以探讨上述多态位点的分子调控机理。方法：采用全基因组合成法合成包含上述多态位点的DNA序列，分别连接到pGL3一promoter载体构建重组质粒，将重组质粒转染至293T细胞，观察携带5对mtDNA质粒对下游双荧光素酶报告基因的表达及荧光素酶mR—NA表达的影响。结果：携带rot235A、mt514—515CA、mtl6183A和mtl6319G的载体转染细胞的双荧光素酶基因表达量显著高于mt235G、mt514—515Del、mtl6183C和mtl6319A（P〈0．01）；携带mtl6290两种基因型的质粒转染细胞报告基因表达没有明显差异。与pGL3-promoter载体相比，携带mtl6319A的质粒转染细胞荧光素酶mRNA极显著下降（P〈0．01），携带mtl6290位点的两种质粒对报告基因mRNA的影响没有差异。结论：mt235、mi514—515、mtl6183和mtl6319多态位点影响荧光素酶基因表达，mt235A、rot514—515CA和mtl6183A上调基因转录和翻译，mtl6319A下调基因转录。这些基因表达上的差异可能是影响人有氧运动能力的重要调控因素。
Case-Control研究錶明，人線粒體基因（mtDNA）D-Loop區mt235、mt514—515、natl6183、mtl6290和mtl6319多態位點與有氧運動能力有關。擬從下遊基因錶達做進一步的研究，以探討上述多態位點的分子調控機理。方法：採用全基因組閤成法閤成包含上述多態位點的DNA序列，分彆連接到pGL3一promoter載體構建重組質粒，將重組質粒轉染至293T細胞，觀察攜帶5對mtDNA質粒對下遊雙熒光素酶報告基因的錶達及熒光素酶mR—NA錶達的影響。結果：攜帶rot235A、mt514—515CA、mtl6183A和mtl6319G的載體轉染細胞的雙熒光素酶基因錶達量顯著高于mt235G、mt514—515Del、mtl6183C和mtl6319A（P〈0．01）；攜帶mtl6290兩種基因型的質粒轉染細胞報告基因錶達沒有明顯差異。與pGL3-promoter載體相比，攜帶mtl6319A的質粒轉染細胞熒光素酶mRNA極顯著下降（P〈0．01），攜帶mtl6290位點的兩種質粒對報告基因mRNA的影響沒有差異。結論：mt235、mi514—515、mtl6183和mtl6319多態位點影響熒光素酶基因錶達，mt235A、rot514—515CA和mtl6183A上調基因轉錄和翻譯，mtl6319A下調基因轉錄。這些基因錶達上的差異可能是影響人有氧運動能力的重要調控因素。
Case-Control연구표명，인선립체기인（mtDNA）D-Loop구mt235、mt514—515、natl6183、mtl6290화mtl6319다태위점여유양운동능력유관。의종하유기인표체주진일보적연구，이탐토상술다태위점적분자조공궤리。방법：채용전기인조합성법합성포함상술다태위점적DNA서렬，분별련접도pGL3일promoter재체구건중조질립，장중조질립전염지293T세포，관찰휴대5대mtDNA질립대하유쌍형광소매보고기인적표체급형광소매mR—NA표체적영향。결과：휴대rot235A、mt514—515CA、mtl6183A화mtl6319G적재체전염세포적쌍형광소매기인표체량현저고우mt235G、mt514—515Del、mtl6183C화mtl6319A（P〈0．01）；휴대mtl6290량충기인형적질립전염세포보고기인표체몰유명현차이。여pGL3-promoter재체상비，휴대mtl6319A적질립전염세포형광소매mRNA겁현저하강（P〈0．01），휴대mtl6290위점적량충질립대보고기인mRNA적영향몰유차이。결론：mt235、mi514—515、mtl6183화mtl6319다태위점영향형광소매기인표체，mt235A、rot514—515CA화mtl6183A상조기인전록화번역，mtl6319A하조기인전록。저사기인표체상적차이가능시영향인유양운동능력적중요조공인소。
Objective ： The gene expression differences between variants of mt 235, mt 514- 515, mt16183 ,mt16290 and mt16319 correlated with enduance performance in human mtDNA D- Loop region were studied. Methods：The gene sequences contained above loci were synthesized respectively,and then constructed with pGL3-promoter vector. The vectors were transfected into 293T cells, and the expression activity and mRNA of the reporter gene in the recombinant expression vectors with different alleles were detected by a dual-luciferase reporter assay system and RT-PCR. Results： Higher relative luciferase activities were detected significantly in vectors containing mt235A, mtS14-515CA, mt16183A and mt16319G than mt235G, mt514- 515Del, mt16183C and mt16319A（P~0.01）. There was no effect for reporter gene expres- sion in vectors containing mt 16290 locus. Compared with pGL3-promoter, luciferase gene mRNA level of transfected pGL3-16319 A cell was decreased significantly, but no differences between vectors contained mt16290. Conclusion： The variation of mt235A, mt514-515CA and ml 16183 A can up-regulate the gene transcription and expression in this study, maybe affecting the gene function, mt16319A can down-regulate the gene transcription. The gene expression differences maybe are the important regulated factors.
