CAJ | 학술논문

目的:探讨人华通胶间充质干细胞(Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)移植对犬退变椎间盘的影响.方法:从新生儿脐带中提取WJMSCs,取增殖良好的第3代细胞,用含有绿色荧光蛋白的腺相关病毒(rAAV2-EGFP)感染标记细胞.选择20只健康成年比格犬作为实验动物,使用穿刺抽吸髓核组织法建立椎间盘退变模型(L4/5、L5/6、L6/7).4周后将犬各节段椎间盘进行分组:L3/4为对照组(A组);L4/5为退变组(B组);L5/6为注射组(C组),注射生理盐水;L6/7为移植组(D组),移植绿色荧光蛋白标记的WJMSCs细胞悬液.造模术前、术后4、8、12、24周行腰椎X线及MRI检查.24周后处死动物取材进行冰冻切片荧光、HE染色及番红O染色等组织学检测,提取髓核组织总RNA,反转录后行Real Time PCR检测,观察蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX-9及Ⅰ型胶原基因表达变化.结果:分离培养的WJMSCs贴壁生长,呈梭形形态,rAAV2-EGFP病毒感染后第3天表达绿色荧光.影像学检查结果显示各组椎间盘高度指数及相对灰度指数在造模术前、术后第4周无统计学差异,术后8、12、24周,D组椎间盘相对高度指数及相对灰度指数较B、C组高(P＜0.05),比A组低(P＜0.05).术后24周,D组髓核组织冰冻切片内能够检测到GFP阳性的WJMSC细胞,HE染色显示D组髓核组织退变比B组和C组轻,番红O染色结果显示D组染色较B组和C组深,基因表达检测结果显示D组Ⅱ型胶原、蛋白多糖及SOX-9基因表达比B、C组高(P＜0.05),但比A组低(P＜0.05).结论:人WJMSCs移植入犬退变椎间盘内能够存活,促进椎间盘细胞外基质Ⅱ型胶原及蛋白多糖合成,维持椎间盘高度及髓核含水量,能够有效延缓椎间盘退变进展.
목적:탐토인화통효간충질간세포(Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)이식대견퇴변추간반적영향.방법:종신생인제대중제취WJMSCs,취증식량호적제3대세포,용함유록색형광단백적선상관병독(rAAV2-EGFP)감염표기세포.선택20지건강성년비격견작위실험동물,사용천자추흡수핵조직법건립추간반퇴변모형(L4/5、L5/6、L6/7).4주후장견각절단추간반진행분조:L3/4위대조조(A조);L4/5위퇴변조(B조);L5/6위주사조(C조),주사생리염수;L6/7위이식조(D조),이식록색형광단백표기적WJMSCs세포현액.조모술전、술후4、8、12、24주행요추X선급MRI검사.24주후처사동물취재진행빙동절편형광、HE염색급번홍O염색등조직학검측,제취수핵조직총RNA,반전록후행Real Time PCR검측,관찰단백다당、Ⅱ형효원、SOX-9급Ⅰ형효원기인표체변화.결과:분리배양적WJMSCs첩벽생장,정사형형태,rAAV2-EGFP병독감염후제3천표체록색형광.영상학검사결과현시각조추간반고도지수급상대회도지수재조모술전、술후제4주무통계학차이,술후8、12、24주,D조추간반상대고도지수급상대회도지수교B、C조고(P＜0.05),비A조저(P＜0.05).술후24주,D조수핵조직빙동절편내능구검측도GFP양성적WJMSC세포,HE염색현시D조수핵조직퇴변비B조화C조경,번홍O염색결과현시D조염색교B조화C조심,기인표체검측결과현시D조Ⅱ형효원、단백다당급SOX-9기인표체비B、C조고(P＜0.05),단비A조저(P＜0.05).결론:인WJMSCs이식입견퇴변추간반내능구존활,촉진추간반세포외기질Ⅱ형효원급단백다당합성,유지추간반고도급수핵함수량,능구유효연완추간반퇴변진전.