中国神经免疫学和神经病学杂志
中國神經免疫學和神經病學雜誌
중국신경면역학화신경병학잡지
Chinese Journal of Neuroimmunology and Neurology
2015年
4期
237-240
,共4页
王健%王玉洁%辛岳%姜新
王健%王玉潔%辛嶽%薑新
왕건%왕옥길%신악%강신
APOE ε2基因%真核表达质粒%基因重组%绿色荧光蛋白
APOE ε2基因%真覈錶達質粒%基因重組%綠色熒光蛋白
APOE ε2기인%진핵표체질립%기인중조%록색형광단백
APOE ε2 gene%eukaryotic expression plasmid%genetic recombination%green fluorescent protein
目的 构建pEGFP-N 1-APOEε2真核表达重组质粒.方法 应用基因定点突变手段,根据载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,对质粒APOE基因cDNA克隆(pMD18-T-APOE3)进行基因定点突变,得到含有APOE2基因的目的片段,将此目的片段插入载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的基因融合.重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序,鉴定目的基因是否成功插入pEGFP-N1质粒.结果 对所得pEGFP-N1-APOEε2质粒插入部分测序结果显示,pEGFP-N1-APOEε2质粒的方向及序列正确,阅读框正确无误,表明APOEε2基因定点突变正确,重组pEGFP-N1-APOEε2质粒构建成功.结论 成功构建了pEGFP-N1-APOEε2真核表达重组质粒.
目的 構建pEGFP-N 1-APOEε2真覈錶達重組質粒.方法 應用基因定點突變手段,根據載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因cDNA剋隆基因序列和錶達載體增彊綠色熒光蛋白真覈錶達載體(pEGFP-N1)質粒上的多剋隆位點設計引物,對質粒APOE基因cDNA剋隆(pMD18-T-APOE3)進行基因定點突變,得到含有APOE2基因的目的片段,將此目的片段插入載體啟動子下遊,與增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的基因融閤.重組質粒經菌液PCR、限製性內切酶酶切和測序,鑒定目的基因是否成功插入pEGFP-N1質粒.結果 對所得pEGFP-N1-APOEε2質粒插入部分測序結果顯示,pEGFP-N1-APOEε2質粒的方嚮及序列正確,閱讀框正確無誤,錶明APOEε2基因定點突變正確,重組pEGFP-N1-APOEε2質粒構建成功.結論 成功構建瞭pEGFP-N1-APOEε2真覈錶達重組質粒.
목적 구건pEGFP-N 1-APOEε2진핵표체중조질립.방법 응용기인정점돌변수단,근거재지단백E(apolipoprotein E,ApoE)기인cDNA극륭기인서렬화표체재체증강록색형광단백진핵표체재체(pEGFP-N1)질립상적다극륭위점설계인물,대질립APOE기인cDNA극륭(pMD18-T-APOE3)진행기인정점돌변,득도함유APOE2기인적목적편단,장차목적편단삽입재체계동자하유,여증강형록색형광단백(EGFP)적기인융합.중조질립경균액PCR、한제성내절매매절화측서,감정목적기인시부성공삽입pEGFP-N1질립.결과 대소득pEGFP-N1-APOEε2질립삽입부분측서결과현시,pEGFP-N1-APOEε2질립적방향급서렬정학,열독광정학무오,표명APOEε2기인정점돌변정학,중조pEGFP-N1-APOEε2질립구건성공.결론 성공구건료pEGFP-N1-APOEε2진핵표체중조질립.
