香港海鸥形菌多重PCR及嵌合荧光PCR检测方法的建立与应用
향항해구형균다중PCR급감합형광PCR검측방법적건립여응용
Development and application of multi-PCR and SYBR Green Ⅰ real-time ramification amplification method for detection of Laribacer hongkongensis
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    Chinese Journal of Zoonoses
    2015年 7期 659-662,668 ,共5页

    沈林海%孔庆鑫%孙建荣%徐虹%金慧%韦凌娅%查捷%王英红%倪晓平

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    Laribacter hongkongensis%multi-PCR method%SYBR Green Ⅰ real-time RAM
    目的 建立香港海鸥形菌(Laribacer hongkongensis,LH)的多重PCR(multi-PCR)及嵌合荧光法(SYBR GreenⅠ)PCR检测方法,并对其在临床及环境微生物方面的应用前景进行评价.方法 通过对62株香港海鸥形菌16S RNA基因和16S-23S rRNA基因间隔区(16-23S rRNA intergenic spacer region,ISR)进行PCR扩增和多序列比对,设计两对特异性引物,建立多重PCR体系,用15种细菌性腹泻标准菌株及临床菌株进行PCR特异性和敏感性检验;并在此基础上针对两对引物分别用嵌合荧光PCR法进行浓度梯度检测,以确定最低检测限.结果 香港海鸥形菌多重PCR法特异性为100％,最低检出限为5×103 CFU/mL菌液;而嵌合荧光PCR法两对引物的最低检出限均达到5×102 CFU/mL菌液.结论 该法的建立为临床及环境微生物学提供了一种快速和灵敏的香港海鸥形菌检测手段.
    목적 건립향항해구형균(Laribacer hongkongensis,LH)적다중PCR(multi-PCR)급감합형광법(SYBR GreenⅠ)PCR검측방법,병대기재림상급배경미생물방면적응용전경진행평개.방법 통과대62주향항해구형균16S RNA기인화16S-23S rRNA기인간격구(16-23S rRNA intergenic spacer region,ISR)진행PCR확증화다서렬비대,설계량대특이성인물,건립다중PCR체계,용15충세균성복사표준균주급림상균주진행PCR특이성화민감성검험;병재차기출상침대량대인물분별용감합형광PCR법진행농도제도검측,이학정최저검측한.결과 향항해구형균다중PCR법특이성위100％,최저검출한위5×103 CFU/mL균액;이감합형광PCR법량대인물적최저검출한균체도5×102 CFU/mL균액.결론 해법적건립위림상급배경미생물학제공료일충쾌속화령민적향항해구형균검측수단.
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