中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
Chinese Journal of Zoonoses
2015年
7期
649-654
,共6页
罗文丽%邱聪龄%余炜嘉%刘志刚%吉坤美%蔡泽浪
囉文麗%邱聰齡%餘煒嘉%劉誌剛%吉坤美%蔡澤浪
라문려%구총령%여위가%류지강%길곤미%채택랑
粉尘螨%α-烯醇化酶%类风湿性关节%表位
粉塵螨%α-烯醇化酶%類風濕性關節%錶位
분진만%α-희순화매%류풍습성관절%표위
Dermatophagoides farina%alpha-enolase%rheumatoid arthritis%epitope
目的 克隆表达粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)α-烯醇化酶(alpha-enolase,ENOA)基因,初步研究其N端B细胞表位与自身免疫性疾病的关系.方法 ①设计特异性引物,从文库中克隆ENOA cDNA;②通过BamH UEcoR Ⅰ双酶切位点,将ENOA基因克隆至pET-His原核表达载体,表达纯化,获得了重组ENOA蛋白;③测定重组ENOA酶活性;④通过Swiss-Model软件模拟ENOA蛋白3D结构,并分析其潜在的N端B细胞表位;合成ENOA的N端表位肽,测定其与类风湿性关节炎患者血清IgG的反应性.结果 ①克隆了ENOA全长cDNA(GenBank登录号KJ421213.1);②成功构建了pET-His-ENOA表达载体,经纯化获得了重组ENOA蛋白.③重组蛋白具有烯醇化酶活性;④瓜氨酸修饰的合成表位肽与类风湿性关节患者血清IgG-ELISA呈阳性反应,与健康对照组血清均不呈反应(P＜0.05).结论 本课题首次克隆表达的重组ENOA蛋白具有烯醇化酶活性;其N端B细胞表位与类风湿性关节炎相关.本研究为尘螨与自身免疫性疾病的相关性研究提供了新的思路.
目的 剋隆錶達粉塵螨(Dermatophagoidesfarinae)α-烯醇化酶(alpha-enolase,ENOA)基因,初步研究其N耑B細胞錶位與自身免疫性疾病的關繫.方法 ①設計特異性引物,從文庫中剋隆ENOA cDNA;②通過BamH UEcoR Ⅰ雙酶切位點,將ENOA基因剋隆至pET-His原覈錶達載體,錶達純化,穫得瞭重組ENOA蛋白;③測定重組ENOA酶活性;④通過Swiss-Model軟件模擬ENOA蛋白3D結構,併分析其潛在的N耑B細胞錶位;閤成ENOA的N耑錶位肽,測定其與類風濕性關節炎患者血清IgG的反應性.結果 ①剋隆瞭ENOA全長cDNA(GenBank登錄號KJ421213.1);②成功構建瞭pET-His-ENOA錶達載體,經純化穫得瞭重組ENOA蛋白.③重組蛋白具有烯醇化酶活性;④瓜氨痠脩飾的閤成錶位肽與類風濕性關節患者血清IgG-ELISA呈暘性反應,與健康對照組血清均不呈反應(P＜0.05).結論 本課題首次剋隆錶達的重組ENOA蛋白具有烯醇化酶活性;其N耑B細胞錶位與類風濕性關節炎相關.本研究為塵螨與自身免疫性疾病的相關性研究提供瞭新的思路.
목적 극륭표체분진만(Dermatophagoidesfarinae)α-희순화매(alpha-enolase,ENOA)기인,초보연구기N단B세포표위여자신면역성질병적관계.방법 ①설계특이성인물,종문고중극륭ENOA cDNA;②통과BamH UEcoR Ⅰ쌍매절위점,장ENOA기인극륭지pET-His원핵표체재체,표체순화,획득료중조ENOA단백;③측정중조ENOA매활성;④통과Swiss-Model연건모의ENOA단백3D결구,병분석기잠재적N단B세포표위;합성ENOA적N단표위태,측정기여류풍습성관절염환자혈청IgG적반응성.결과 ①극륭료ENOA전장cDNA(GenBank등록호KJ421213.1);②성공구건료pET-His-ENOA표체재체,경순화획득료중조ENOA단백.③중조단백구유희순화매활성;④과안산수식적합성표위태여류풍습성관절환자혈청IgG-ELISA정양성반응,여건강대조조혈청균불정반응(P＜0.05).결론 본과제수차극륭표체적중조ENOA단백구유희순화매활성;기N단B세포표위여류풍습성관절염상관.본연구위진만여자신면역성질병적상관성연구제공료신적사로.
