实验动物与比较医学
實驗動物與比較醫學
실험동물여비교의학
Laboratory Animal and Comparative Medicine
2015年
4期
288-293
,共6页
陈克研%陈振文%董婉维%郑志红
陳剋研%陳振文%董婉維%鄭誌紅
진극연%진진문%동완유%정지홍
猪%转基因%磁小体(BMP)%聚乙烯亚胺(PEI)%精子介导的基因转移
豬%轉基因%磁小體(BMP)%聚乙烯亞胺(PEI)%精子介導的基因轉移
저%전기인%자소체(BMP)%취을희아알(PEI)%정자개도적기인전이
Pig%Transgenic%Bacteria magnetic particles (BMP)%Polyethylenimine (PEI)%Sperm-mediated gene transfer
目的 以磁小体(BMP)和聚乙烯亚胺(PEI)为载体,通过睾丸注射精子介导法建立转基因猪模型.方法 将实验室保存的脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)绿色荧光蛋白(GFP)质粒与BMP和PEI混匀,制备BMP-PEI-PLA2-GFP混合物,采用睾丸多点注射法接种巴马小型猪,于接种后第2周、4周、6周至第20周采集精液,分别用RT-PCR和免疫荧光鉴定外源基因的表达情况;取阳性精液,对母猪实施人工授精;PCR及RT-PCR对所产仔猪进行鉴定.结果 精液中GFP基因于接种后第4周首现并持续至第16周;荧光显微镜检查可观察到GFP蛋白主要表达于精子顶体后区及精子尾颈部;经人工授精所产21头仔猪中,9头猪用PCR可检测GFP片段,用RT-PCR检测PLA2表达,该9头猪的表达量明显高于其它猪,总阳性率达42.86％.结论 BMP和PEI结合可作为良好的携带外源基因的非病毒性载体,用该载体通过精子介导法可以达到迅速制备转基因猪的目的,其成本低、方法简单、便捷.
目的 以磁小體(BMP)和聚乙烯亞胺(PEI)為載體,通過睪汍註射精子介導法建立轉基因豬模型.方法 將實驗室保存的脂蛋白燐脂酶A2(Lp-PLA2)綠色熒光蛋白(GFP)質粒與BMP和PEI混勻,製備BMP-PEI-PLA2-GFP混閤物,採用睪汍多點註射法接種巴馬小型豬,于接種後第2週、4週、6週至第20週採集精液,分彆用RT-PCR和免疫熒光鑒定外源基因的錶達情況;取暘性精液,對母豬實施人工授精;PCR及RT-PCR對所產仔豬進行鑒定.結果 精液中GFP基因于接種後第4週首現併持續至第16週;熒光顯微鏡檢查可觀察到GFP蛋白主要錶達于精子頂體後區及精子尾頸部;經人工授精所產21頭仔豬中,9頭豬用PCR可檢測GFP片段,用RT-PCR檢測PLA2錶達,該9頭豬的錶達量明顯高于其它豬,總暘性率達42.86％.結論 BMP和PEI結閤可作為良好的攜帶外源基因的非病毒性載體,用該載體通過精子介導法可以達到迅速製備轉基因豬的目的,其成本低、方法簡單、便捷.
목적 이자소체(BMP)화취을희아알(PEI)위재체,통과고환주사정자개도법건립전기인저모형.방법 장실험실보존적지단백린지매A2(Lp-PLA2)록색형광단백(GFP)질립여BMP화PEI혼균,제비BMP-PEI-PLA2-GFP혼합물,채용고환다점주사법접충파마소형저,우접충후제2주、4주、6주지제20주채집정액,분별용RT-PCR화면역형광감정외원기인적표체정황;취양성정액,대모저실시인공수정;PCR급RT-PCR대소산자저진행감정.결과 정액중GFP기인우접충후제4주수현병지속지제16주;형광현미경검사가관찰도GFP단백주요표체우정자정체후구급정자미경부;경인공수정소산21두자저중,9두저용PCR가검측GFP편단,용RT-PCR검측PLA2표체,해9두저적표체량명현고우기타저,총양성솔체42.86％.결론 BMP화PEI결합가작위량호적휴대외원기인적비병독성재체,용해재체통과정자개도법가이체도신속제비전기인저적목적,기성본저、방법간단、편첩.
