植物保护
植物保護
식물보호
Plant Protection
2015年
4期
125-130
,共6页
麻文建%朱天辉%韩珊
痳文建%硃天輝%韓珊
마문건%주천휘%한산
寄生隐丛赤壳菌%分子检测%ITS%特异引物%巢氏 PCR
寄生隱叢赤殼菌%分子檢測%ITS%特異引物%巢氏 PCR
기생은총적각균%분자검측%ITS%특이인물%소씨 PCR
Cryphonectria parasitica%molecular detection%ITS%specific primer%nested PCR
寄生隐丛赤壳菌是引起板栗疫病的致病菌。为建立该菌的分子检测技术,本研究首先采用通用引物 ITS1/ITS4对分离自四川雅安、泸州及重庆的寄生隐丛赤壳菌及其他参试菌株的 ITS 区进行 PCR 扩增和测序比对。根据该片段与 GenBank 中隐丛赤壳属其他种的 ITS 序列差异,设计了寄生隐丛赤壳菌的特异性引物 ITSP1/ITSP2,片段扩增大小为462 bp。利用该引物对菌株基因组 DNA 进行扩增,可以将寄生隐丛赤壳菌与其他参试菌区分开,检测灵敏度达30 pg。而以引物 ITS1/ITS4和 ITSP1/ITSP2进行的巢氏 PCR,可检测到30 fg 基因组 DNA,其灵敏度较常规 PCR 提高了1000倍。利用巢氏 PCR 检测体系对发病程度不同的组织和携菌组织进行检测,均能快速稳定地检测出寄生隐丛赤壳菌。
寄生隱叢赤殼菌是引起闆慄疫病的緻病菌。為建立該菌的分子檢測技術,本研究首先採用通用引物 ITS1/ITS4對分離自四川雅安、瀘州及重慶的寄生隱叢赤殼菌及其他參試菌株的 ITS 區進行 PCR 擴增和測序比對。根據該片段與 GenBank 中隱叢赤殼屬其他種的 ITS 序列差異,設計瞭寄生隱叢赤殼菌的特異性引物 ITSP1/ITSP2,片段擴增大小為462 bp。利用該引物對菌株基因組 DNA 進行擴增,可以將寄生隱叢赤殼菌與其他參試菌區分開,檢測靈敏度達30 pg。而以引物 ITS1/ITS4和 ITSP1/ITSP2進行的巢氏 PCR,可檢測到30 fg 基因組 DNA,其靈敏度較常規 PCR 提高瞭1000倍。利用巢氏 PCR 檢測體繫對髮病程度不同的組織和攜菌組織進行檢測,均能快速穩定地檢測齣寄生隱叢赤殼菌。
기생은총적각균시인기판률역병적치병균。위건립해균적분자검측기술,본연구수선채용통용인물 ITS1/ITS4대분리자사천아안、로주급중경적기생은총적각균급기타삼시균주적 ITS 구진행 PCR 확증화측서비대。근거해편단여 GenBank 중은총적각속기타충적 ITS 서렬차이,설계료기생은총적각균적특이성인물 ITSP1/ITSP2,편단확증대소위462 bp。이용해인물대균주기인조 DNA 진행확증,가이장기생은총적각균여기타삼시균구분개,검측령민도체30 pg。이이인물 ITS1/ITS4화 ITSP1/ITSP2진행적소씨 PCR,가검측도30 fg 기인조 DNA,기령민도교상규 PCR 제고료1000배。이용소씨 PCR 검측체계대발병정도불동적조직화휴균조직진행검측,균능쾌속은정지검측출기생은총적각균。