氨基酸和生物资源
氨基痠和生物資源
안기산화생물자원
Amino Acids and Biotic Resources
2015年
3期
51-56
,共6页
袁玉琦%张巨源%王莉%陈雯莉
袁玉琦%張巨源%王莉%陳雯莉
원옥기%장거원%왕리%진문리
抗体纯化%PVDF膜%蛋白吸附
抗體純化%PVDF膜%蛋白吸附
항체순화%PVDF막%단백흡부
antibody purification%PVDF membrane%protein adsorption
通过结合有抗原的PVDF膜进行亲和纯化是小规模快速获取特异性抗体的一种重要手段.该方法的关键步骤之一是将抗原蛋白有效地吸附到PVDF膜上.尽管人们广泛使用PVDF膜亲和纯化抗体,但对影响PVDF膜吸附抗原蛋白的因素至今仍缺乏系统研究.以BSA为模型蛋白,检测在不同蛋白浓度、不同孵育时间、不同溶质溶液和不同pH值的情况下,PVDF膜吸附蛋白的效率.当蛋白溶液为PBS时,1 cm2 PVDF膜与2 mg·mLl BSA溶液孵育1h可达到其最大吸附率.常见的蛋白质缓冲液组分对PVDF膜的蛋白吸附率影响不一.其中,咪唑、Tris-HCl、NaCl、KCl在广泛的浓度范围内对PVDF膜吸附蛋白没有明显影响,而较高浓度的SDS、Triton-X 100、Tween-20、乙二醇、甘油、盐酸胍、尿素等可显著降低PVDF膜对蛋白的吸附效率,在pH为6.5～9.5的Tris-HCl中,随着pH的增高而吸附效率降低.
通過結閤有抗原的PVDF膜進行親和純化是小規模快速穫取特異性抗體的一種重要手段.該方法的關鍵步驟之一是將抗原蛋白有效地吸附到PVDF膜上.儘管人們廣汎使用PVDF膜親和純化抗體,但對影響PVDF膜吸附抗原蛋白的因素至今仍缺乏繫統研究.以BSA為模型蛋白,檢測在不同蛋白濃度、不同孵育時間、不同溶質溶液和不同pH值的情況下,PVDF膜吸附蛋白的效率.噹蛋白溶液為PBS時,1 cm2 PVDF膜與2 mg·mLl BSA溶液孵育1h可達到其最大吸附率.常見的蛋白質緩遲液組分對PVDF膜的蛋白吸附率影響不一.其中,咪唑、Tris-HCl、NaCl、KCl在廣汎的濃度範圍內對PVDF膜吸附蛋白沒有明顯影響,而較高濃度的SDS、Triton-X 100、Tween-20、乙二醇、甘油、鹽痠胍、尿素等可顯著降低PVDF膜對蛋白的吸附效率,在pH為6.5～9.5的Tris-HCl中,隨著pH的增高而吸附效率降低.
통과결합유항원적PVDF막진행친화순화시소규모쾌속획취특이성항체적일충중요수단.해방법적관건보취지일시장항원단백유효지흡부도PVDF막상.진관인문엄범사용PVDF막친화순화항체,단대영향PVDF막흡부항원단백적인소지금잉결핍계통연구.이BSA위모형단백,검측재불동단백농도、불동부육시간、불동용질용액화불동pH치적정황하,PVDF막흡부단백적효솔.당단백용액위PBS시,1 cm2 PVDF막여2 mg·mLl BSA용액부육1h가체도기최대흡부솔.상견적단백질완충액조분대PVDF막적단백흡부솔영향불일.기중,미서、Tris-HCl、NaCl、KCl재엄범적농도범위내대PVDF막흡부단백몰유명현영향,이교고농도적SDS、Triton-X 100、Tween-20、을이순、감유、염산고、뇨소등가현저강저PVDF막대단백적흡부효솔,재pH위6.5～9.5적Tris-HCl중,수착pH적증고이흡부효솔강저.
