安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
Acta Universitatis Medicinalis Anhui
2015年
11期
1629-1633
,共5页
李贵平%李维祖%段文婷%李卫平
李貴平%李維祖%段文婷%李衛平
리귀평%리유조%단문정%리위평
高胰岛素%人肾小球系膜细胞%黄芪甲苷%活性氧%磷酸化蛋白激酶B%磷酸化哺乳动物雷帕雷素靶蛋白
高胰島素%人腎小毬繫膜細胞%黃芪甲苷%活性氧%燐痠化蛋白激酶B%燐痠化哺乳動物雷帕雷素靶蛋白
고이도소%인신소구계막세포%황기갑감%활성양%린산화단백격매B%린산화포유동물뢰파뢰소파단백
high insulin%human mesangial cells%astragalosides IV%ROS%p-Akt%p-mTOR
目的：研究黄芪甲苷（As-IV）对高胰岛素诱导人肾小球系膜细胞（HMCs）损伤的保护作用及其机制。方法以HMCs 为研究对象，用 MTT 法检测不同浓度胰岛素作用不同时间后对 HMCs 增殖的影响，筛选胰岛素的量效与时效关系；实验设正常组、高胰岛素（64 nmol／L）组、二碘苯（DPI 10μmol／L）组、抗氧化剂 Tempol（100μmol／L）组、PI3K／Akt 信号通路抑制剂 LY294002（10μmol／L）组与黄芪甲苷（As-Ⅳ25、50、100μmol／L）组。培养48 h 后，MTT 法检测 HMCs 的细胞增殖状况，DCFH-DA 法测定细胞内活性氧（ROS）含量， Western blot 法检测 NADPH 氧化酶4（NOX4）、磷酸化蛋白激酶 B（p-PKB）（又称 p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）蛋白表达的变化。结果随着浓度增加与作用时间延长，胰岛素对 HMCs 增殖有促进作用且有量效与时效关系；与高胰岛素组比较，DPI 组、Tempol 组、LY294002组与 As-IV 25、50、100μmol／L 组均能有效抑制高胰岛素诱导的细胞增殖，减少细胞内 ROS 含量，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR 蛋白的高表达（P ＜0．05，P ＜0．01）。结论胰岛素呈时间和浓度依赖性促 HMCs 细胞增殖；As-IV 对高胰岛素诱导的 HMCs 有保护作用，其作用机制可能与抑制 HMCs 的过度增殖，减少细胞内 ROS 生成，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR蛋白高表达有关。
目的：研究黃芪甲苷（As-IV）對高胰島素誘導人腎小毬繫膜細胞（HMCs）損傷的保護作用及其機製。方法以HMCs 為研究對象，用 MTT 法檢測不同濃度胰島素作用不同時間後對 HMCs 增殖的影響，篩選胰島素的量效與時效關繫；實驗設正常組、高胰島素（64 nmol／L）組、二碘苯（DPI 10μmol／L）組、抗氧化劑 Tempol（100μmol／L）組、PI3K／Akt 信號通路抑製劑 LY294002（10μmol／L）組與黃芪甲苷（As-Ⅳ25、50、100μmol／L）組。培養48 h 後，MTT 法檢測 HMCs 的細胞增殖狀況，DCFH-DA 法測定細胞內活性氧（ROS）含量， Western blot 法檢測 NADPH 氧化酶4（NOX4）、燐痠化蛋白激酶 B（p-PKB）（又稱 p-Akt）、燐痠化哺乳動物雷帕黴素靶蛋白（p-mTOR）蛋白錶達的變化。結果隨著濃度增加與作用時間延長，胰島素對 HMCs 增殖有促進作用且有量效與時效關繫；與高胰島素組比較，DPI 組、Tempol 組、LY294002組與 As-IV 25、50、100μmol／L 組均能有效抑製高胰島素誘導的細胞增殖，減少細胞內 ROS 含量，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR 蛋白的高錶達（P ＜0．05，P ＜0．01）。結論胰島素呈時間和濃度依賴性促 HMCs 細胞增殖；As-IV 對高胰島素誘導的 HMCs 有保護作用，其作用機製可能與抑製 HMCs 的過度增殖，減少細胞內 ROS 生成，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR蛋白高錶達有關。
목적：연구황기갑감（As-IV）대고이도소유도인신소구계막세포（HMCs）손상적보호작용급기궤제。방법이HMCs 위연구대상，용 MTT 법검측불동농도이도소작용불동시간후대 HMCs 증식적영향，사선이도소적량효여시효관계；실험설정상조、고이도소（64 nmol／L）조、이전분（DPI 10μmol／L）조、항양화제 Tempol（100μmol／L）조、PI3K／Akt 신호통로억제제 LY294002（10μmol／L）조여황기갑감（As-Ⅳ25、50、100μmol／L）조。배양48 h 후，MTT 법검측 HMCs 적세포증식상황，DCFH-DA 법측정세포내활성양（ROS）함량， Western blot 법검측 NADPH 양화매4（NOX4）、린산화단백격매 B（p-PKB）（우칭 p-Akt）、린산화포유동물뢰파매소파단백（p-mTOR）단백표체적변화。결과수착농도증가여작용시간연장，이도소대 HMCs 증식유촉진작용차유량효여시효관계；여고이도소조비교，DPI 조、Tempol 조、LY294002조여 As-IV 25、50、100μmol／L 조균능유효억제고이도소유도적세포증식，감소세포내 ROS 함량，강저 NOX4、p-Akt、p-mTOR 단백적고표체（P ＜0．05，P ＜0．01）。결론이도소정시간화농도의뢰성촉 HMCs 세포증식；As-IV 대고이도소유도적 HMCs 유보호작용，기작용궤제가능여억제 HMCs 적과도증식，감소세포내 ROS 생성，강저 NOX4、p-Akt、p-mTOR단백고표체유관。
Objective To investigate the protective effects of astragalosides IV (As-IV)on high insulin induced human mesangial cells (HMCs)injury in vitro and its mechanisms.Methods We used HMCs as research object, treated HMCs with different concentrations and time of insulin,analyzed the proliferation by MTT assay to select the dose-and time-dependent manners of insulin.The HMCs was divided and treated as follows:normal group (NG), high insulin group (HINS,64 nmol /L),DPI (10 μmol /L),Tempol (100 μmol /L),LY294002 (10 μmol /L) and As-IV (25,50,100 μmol /L).After treatment for 48 hours,the proliferation of HMCs was analyzed by MTT assay.The reactive oxygen species (ROS)production was measured by 2,7-dichlorodihydto fluorescin diacetate (DCFH-DA).The expressions of NADPH oxidase 4 (NOX4),phosphor-protein kinase b (p-PKB)also named p-Akt and phosphor-mammalian target of rapamycin (p-mTOR)were analyzed by Western blot.Results The prolif-eration of HMCs was enhanced in a dose-and time-dependent manner by increasing concentrations and time of insu-lin.Compared with HINS group,DPI,Tempol,LY294002,As-IV treatment significantly inhibited HMCs prolifer-ation,reduced intracellular ROS contents and decreased expression of NOX4,p-Akt and p-mTOR (P <0.05,P <0.01).Conclusion Insulin promotes proliferation of HMCs in a time-and dose-dependent manner.As-IV has protective effects on high insulin induced HMCs injury due to inhibition of HMCs proliferation,oxidative damage, NOX4,p-Akt and p-mTOR expression.
