CAJ | 학술논문

研究目的：探讨不同浓度红景天苷对成肌细胞株C2C12体外分化的影响及可能机制，有望为成肌细胞增殖分化寻求更有效的外源调控物，以促进成肌细胞的移植和临床应用，同时为进一步开展红景天苷在体内骨骼肌损伤中的作用及机制研究奠定基础。研究方法：研究1：红景天苷对成肌细胞体外分化的影响：1）在C2C12中加入不同浓度红景天苷处理，在诱导成肌分化过程中，应用相差显微镜观察不同浓度红景天苷对C2C12分化过程中汇聚、融合和形成多核肌管的影响；2）应用免疫荧光组化方法，分析不同浓度红景天苷对C2C12成肌分化融合率的影响；3）应用real‐time PCR和Western Blotting方法，检测红景天苷对C2C12成肌分化特异基因和蛋白表达的影响；研究2：红景天苷影响成肌细胞体外分化的机制初探：应用Western Blotting方法，检测红景天苷处理后C2C12成肌分化中 TGF‐β／Smad信号通路的变化。结果：50μg 红景天苷处理：研究1：1）光镜观察结果从形态学上显示，红景天苷处理显著抑制C2C12细胞的融合和多核肌管的形成；2）免疫荧光检测结果表明 My‐osin‐neonatal（E‐MHC）阳性面积和myogenin阳性核均显著减少（P＜0．05），显著抑制C2C12细胞分化过程中肌管形成，促进细胞增殖；3）real‐time PCR和 Western blotting检测结果表明，成肌分化特异因子MyoD和myogenin基因和蛋白表达水平均显著下降（ P＜0．05），显著抑制C2C12细胞分化过程中细胞的融合和肌管的形成；研究2：Western blotting 检测结果表明，红景天苷显著抑制 C2C12细胞分化效应，伴有 Smad2／Smad3磷酸化激活增加，尤其是Smad3激活水平显著增加（ P＜0．01）；30μg红景天苷处理作用不显著（ P＞0．05）。结论：1）红景天苷能显著抑制骨骼肌成肌细胞体外成肌分化，并促进骨骼肌成肌细胞激活增殖，促进卫星细胞库储备增加。2）红景天苷对骨骼肌成肌细胞体外分化增殖的影响存在剂量依赖性，以50μg红景天苷干预能达到显著效果。3）红景天苷可能是通过促进 TGF‐β／Smad通路的关键介导子Smad2和Smad3（尤其是Smad3）磷酸化来发挥作用。研究目的：探討不同濃度紅景天苷對成肌細胞株C2C12體外分化的影響及可能機製，有望為成肌細胞增殖分化尋求更有效的外源調控物，以促進成肌細胞的移植和臨床應用，同時為進一步開展紅景天苷在體內骨骼肌損傷中的作用及機製研究奠定基礎。研究方法：研究1：紅景天苷對成肌細胞體外分化的影響：1）在C2C12中加入不同濃度紅景天苷處理，在誘導成肌分化過程中，應用相差顯微鏡觀察不同濃度紅景天苷對C2C12分化過程中彙聚、融閤和形成多覈肌管的影響；2）應用免疫熒光組化方法，分析不同濃度紅景天苷對C2C12成肌分化融閤率的影響；3）應用real‐time PCR和Western Blotting方法，檢測紅景天苷對C2C12成肌分化特異基因和蛋白錶達的影響；研究2：紅景天苷影響成肌細胞體外分化的機製初探：應用Western Blotting方法，檢測紅景天苷處理後C2C12成肌分化中 TGF‐β／Smad信號通路的變化。結果：50μg 紅景天苷處理：研究1：1）光鏡觀察結果從形態學上顯示，紅景天苷處理顯著抑製C2C12細胞的融閤和多覈肌管的形成；2）免疫熒光檢測結果錶明 My‐osin‐neonatal（E‐MHC）暘性麵積和myogenin暘性覈均顯著減少（P＜0．05），顯著抑製C2C12細胞分化過程中肌管形成，促進細胞增殖；3）real‐time PCR和 Western blotting檢測結果錶明，成肌分化特異因子MyoD和myogenin基因和蛋白錶達水平均顯著下降（ P＜0．05），顯著抑製C2C12細胞分化過程中細胞的融閤和肌管的形成；研究2：Western blotting 檢測結果錶明，紅景天苷顯著抑製 C2C12細胞分化效應，伴有 Smad2／Smad3燐痠化激活增加，尤其是Smad3激活水平顯著增加（ P＜0．01）；30μg紅景天苷處理作用不顯著（ P＞0．05）。結論：1）紅景天苷能顯著抑製骨骼肌成肌細胞體外成肌分化，併促進骨骼肌成肌細胞激活增殖，促進衛星細胞庫儲備增加。2）紅景天苷對骨骼肌成肌細胞體外分化增殖的影響存在劑量依賴性，以50μg紅景天苷榦預能達到顯著效果。3）紅景天苷可能是通過促進 TGF‐β／Smad通路的關鍵介導子Smad2和Smad3（尤其是Smad3）燐痠化來髮揮作用。
연구목적：탐토불동농도홍경천감대성기세포주C2C12체외분화적영향급가능궤제，유망위성기세포증식분화심구경유효적외원조공물，이촉진성기세포적이식화림상응용，동시위진일보개전홍경천감재체내골격기손상중적작용급궤제연구전정기출。연구방법：연구1：홍경천감대성기세포체외분화적영향：1）재C2C12중가입불동농도홍경천감처리，재유도성기분화과정중，응용상차현미경관찰불동농도홍경천감대C2C12분화과정중회취、융합화형성다핵기관적영향；2）응용면역형광조화방법，분석불동농도홍경천감대C2C12성기분화융합솔적영향；3）응용real‐time PCR화Western Blotting방법，검측홍경천감대C2C12성기분화특이기인화단백표체적영향；연구2：홍경천감영향성기세포체외분화적궤제초탐：응용Western Blotting방법，검측홍경천감처리후C2C12성기분화중 TGF‐β／Smad신호통로적변화。결과：50μg 홍경천감처리：연구1：1）광경관찰결과종형태학상현시，홍경천감처리현저억제C2C12세포적융합화다핵기관적형성；2）면역형광검측결과표명 My‐osin‐neonatal（E‐MHC）양성면적화myogenin양성핵균현저감소（P＜0．05），현저억제C2C12세포분화과정중기관형성，촉진세포증식；3）real‐time PCR화 Western blotting검측결과표명，성기분화특이인자MyoD화myogenin기인화단백표체수평균현저하강（ P＜0．05），현저억제C2C12세포분화과정중세포적융합화기관적형성；연구2：Western blotting 검측결과표명，홍경천감현저억제 C2C12세포분화효응，반유 Smad2／Smad3린산화격활증가，우기시Smad3격활수평현저증가（ P＜0．01）；30μg홍경천감처리작용불현저（ P＞0．05）。결론：1）홍경천감능현저억제골격기성기세포체외성기분화，병촉진골격기성기세포격활증식，촉진위성세포고저비증가。2）홍경천감대골격기성기세포체외분화증식적영향존재제량의뢰성，이50μg홍경천감간예능체도현저효과。3）홍경천감가능시통과촉진 TGF‐β／Smad통로적관건개도자Smad2화Smad3（우기시Smad3）린산화래발휘작용。
Objective :This study is aim to explore the effect of different concentrations of sali‐droside on myoblast differentiation in vitro and its possible mechanism ,w hich can help to find a more effective exogenous regulating substance for myoblast differentiation to promote the myo‐blast transplantation ,and set the foundation for further study of the effect of salidroside on skeletal muscle in vivo .Methods :Part one :The effect of different concentrations of salidroside on myoblast differentiation in vitro :1 )observe the morphology of differential myoblast C2C12 which were treated with 0 ,30 ,50 μg/ml salidroside to induce differentiation by Phase micro‐graphs ;2)Detect the cell fusion index affected by salidroside using immunofluorescence ;3)De‐tect the expressions of myogenic differentiation‐specific mRNAs and proteins affected by sali‐droside using Western Blotting and real time‐PCR .Part two :The possible mechanism of above study :Detect TGF‐β/Smad3 pathway protein expression in differential C2C12 cell treated with 0 ,30 ,50μg/ml Sal using Western Blotting .Results :Treated with 50 μg/ml salidroside :Part one :1)Salidroside inhibit C2C12 fusion and myotube form in morphological by Phase mi‐crographs ;2)Myosin‐neonatal Positive area and myogenin Positive Nuclei decreased significant‐ly by immunofluorescence(P< 0 .05) ,which inhibited myotube form notably ;3)The expres‐sions of MyoD and myogenin in mRNA and protein both decreased notably by real‐time PCR and Western blotting(P< 0 .05) ,which inhibited cell fusion and myotube form during C2C12 differentiation .Part two :Salidroside inhibit C2C12 differentiation associated with increases in Smad2/Smad3 phosphorylation ,especially p‐Smad3 ( P< 0 .01 ) .The results treated with 30μg/ml salidroside is insignificant (P> 0 .05) .Conclusion :1)Salidroside inhibit myogenic dif‐ferentiation of C2C12 cell significantly ,and promote cell proliferation ,to add satellite cells band reserve .2 ) Salidroside inhibits myogenic differentiation in a dose‐dependent manner , 50μg/ml Salidroside is the best .3 )Salidroside inhibits myogenic differentiation possibly by ac‐tivating Smad2/Smad3(a key mediator in TGF‐β/Smad pathway) phosphorylation .