工业微生物
工業微生物
공업미생물
Industrial Microbiology
2015年
4期
39-45
,共7页
蜡样芽孢杆菌%克隆表达%亮氨酸脱氢酶%酶学性质
蠟樣芽孢桿菌%剋隆錶達%亮氨痠脫氫酶%酶學性質
사양아포간균%극륭표체%량안산탈경매%매학성질
Bacillus cereus%clone and expression%leucine dehydrogenase%enzymatic properties
本研究采用PCR技术从蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus基因组DNA中克隆出亮氨酸脱氢酶基因,构建重组表达质粒pET28α(+)-ldh,实现在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组亮氨酸脱氢酶的酶学性质.结果表明,从Bacillus cereus成功克隆的亮氨酸脱氢酶编码基因约为1 000 bp,表达的重组亮氨酸脱氢酶相对分子质量约为40 kDa.酶学研究结果表明:该酶的最适反应温度为37℃,其热稳定性好,30℃的半衰期长达330 h;最适反应pH为9.5;在pH7.0 ～8.0的缓冲液中保存24 h后仍保持原有酶活力的80％以上;金属离子Fe2+对该酶具有明显的促进作用,而EDTA强烈抑制亮氨酸脱氢酶的活性.动力学分析结果表明该酶对底物NADH催化的Km和Vmax分别为0.635 mmol/L和1.54 μmol/(L·min).亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的成功表达为手性氨基酸的生物合成提供了可能.
本研究採用PCR技術從蠟樣芽孢桿菌Bacillus cereus基因組DNA中剋隆齣亮氨痠脫氫酶基因,構建重組錶達質粒pET28α(+)-ldh,實現在大腸桿菌中的高效錶達,併分析重組亮氨痠脫氫酶的酶學性質.結果錶明,從Bacillus cereus成功剋隆的亮氨痠脫氫酶編碼基因約為1 000 bp,錶達的重組亮氨痠脫氫酶相對分子質量約為40 kDa.酶學研究結果錶明:該酶的最適反應溫度為37℃,其熱穩定性好,30℃的半衰期長達330 h;最適反應pH為9.5;在pH7.0 ～8.0的緩遲液中保存24 h後仍保持原有酶活力的80％以上;金屬離子Fe2+對該酶具有明顯的促進作用,而EDTA彊烈抑製亮氨痠脫氫酶的活性.動力學分析結果錶明該酶對底物NADH催化的Km和Vmax分彆為0.635 mmol/L和1.54 μmol/(L·min).亮氨痠脫氫酶基因在大腸桿菌中的成功錶達為手性氨基痠的生物閤成提供瞭可能.
본연구채용PCR기술종사양아포간균Bacillus cereus기인조DNA중극륭출량안산탈경매기인,구건중조표체질립pET28α(+)-ldh,실현재대장간균중적고효표체,병분석중조량안산탈경매적매학성질.결과표명,종Bacillus cereus성공극륭적량안산탈경매편마기인약위1 000 bp,표체적중조량안산탈경매상대분자질량약위40 kDa.매학연구결과표명:해매적최괄반응온도위37℃,기열은정성호,30℃적반쇠기장체330 h;최괄반응pH위9.5;재pH7.0 ～8.0적완충액중보존24 h후잉보지원유매활력적80％이상;금속리자Fe2+대해매구유명현적촉진작용,이EDTA강렬억제량안산탈경매적활성.동역학분석결과표명해매대저물NADH최화적Km화Vmax분별위0.635 mmol/L화1.54 μmol/(L·min).량안산탈경매기인재대장간균중적성공표체위수성안기산적생물합성제공료가능.
