工业微生物
工業微生物
공업미생물
Industrial Microbiology
2015年
4期
1-6
,共6页
Methanocella conradii HZ254%嗜热型碳酸酐酶%克隆表达%酶学性质
Methanocella conradii HZ254%嗜熱型碳痠酐酶%剋隆錶達%酶學性質
Methanocella conradii HZ254%기열형탄산항매%극륭표체%매학성질
Methanocella conradii HZ254%thermophilic carbonic anhydrase%cloning and expression%enzymatic properties
本文将嗜热菌Methanocella conradii HZ254的β型碳酸酐酶基因mtc在大肠杆菌中进行了克隆和表达.将PCR扩增得到mtc基因与pET-24a(+)载体进行连接,转入大肠杆菌JM109中,得到工程菌JM109-pET24a-mtc.诱导表达后做SDS-PAGE电泳,显示有与预期分子量大小相近的(约29 kDa)产物条带.该表达产物具有催化CO2水合的活性,但没有酯酶活力.研究表明,重组酶在40℃下稳定,40℃～60℃对酶有激活作用,65℃以上会导致酶的失活.在pH 7.0时,酶有最好的pH稳定性.1 mmol/L的Fe2+、Mg2+、Mn2+和Ca2+均对酶有激活作用,而Cu2+则有明显的抑制作用.1 mmol/L的F-对酶活没有明显的影响,而磺胺和I-则有比较明显的抑制作用,Br-、HCO3-、C1-、NO3-和SO42-对酶均有一定的抑制作用.
本文將嗜熱菌Methanocella conradii HZ254的β型碳痠酐酶基因mtc在大腸桿菌中進行瞭剋隆和錶達.將PCR擴增得到mtc基因與pET-24a(+)載體進行連接,轉入大腸桿菌JM109中,得到工程菌JM109-pET24a-mtc.誘導錶達後做SDS-PAGE電泳,顯示有與預期分子量大小相近的(約29 kDa)產物條帶.該錶達產物具有催化CO2水閤的活性,但沒有酯酶活力.研究錶明,重組酶在40℃下穩定,40℃～60℃對酶有激活作用,65℃以上會導緻酶的失活.在pH 7.0時,酶有最好的pH穩定性.1 mmol/L的Fe2+、Mg2+、Mn2+和Ca2+均對酶有激活作用,而Cu2+則有明顯的抑製作用.1 mmol/L的F-對酶活沒有明顯的影響,而磺胺和I-則有比較明顯的抑製作用,Br-、HCO3-、C1-、NO3-和SO42-對酶均有一定的抑製作用.
본문장기열균Methanocella conradii HZ254적β형탄산항매기인mtc재대장간균중진행료극륭화표체.장PCR확증득도mtc기인여pET-24a(+)재체진행련접,전입대장간균JM109중,득도공정균JM109-pET24a-mtc.유도표체후주SDS-PAGE전영,현시유여예기분자량대소상근적(약29 kDa)산물조대.해표체산물구유최화CO2수합적활성,단몰유지매활력.연구표명,중조매재40℃하은정,40℃～60℃대매유격활작용,65℃이상회도치매적실활.재pH 7.0시,매유최호적pH은정성.1 mmol/L적Fe2+、Mg2+、Mn2+화Ca2+균대매유격활작용,이Cu2+칙유명현적억제작용.1 mmol/L적F-대매활몰유명현적영향,이광알화I-칙유비교명현적억제작용,Br-、HCO3-、C1-、NO3-화SO42-대매균유일정적억제작용.
