动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
Progress in Veterinary Medicine
2015年
9期
55-59
,共5页
杨媛%朱艳平%岳锋%孙国鹏%张艳芳%银梅%王选年
楊媛%硃豔平%嶽鋒%孫國鵬%張豔芳%銀梅%王選年
양원%주염평%악봉%손국붕%장염방%은매%왕선년
猪PD-1%胞外区%克隆%原核表达
豬PD-1%胞外區%剋隆%原覈錶達
저PD-1%포외구%극륭%원핵표체
为研究PD-1/PD-L1通路在猪免疫抑制性疾病中的作用,根据猪的PD-1的基因序列,设计扩增其胞外区的引物,从猪PBMC基因组中通过PCR扩增获得猪PD-1胞外区基因片段,测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET32-PD1,转化大肠埃希菌DH5α.挑选可疑菌落鉴定正确后转至Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果表明,在37℃、0.5mmol/L IPTG条件下诱导获得33 ku的PD-1胞外区融合蛋白,能够被其多抗血清、His标签抗体和人PD-1抗体所识别.本研究为制备其单克隆抗体和研究PD-1/PD-L1在猪免疫抑制性疾病中的作用提供了材料.
為研究PD-1/PD-L1通路在豬免疫抑製性疾病中的作用,根據豬的PD-1的基因序列,設計擴增其胞外區的引物,從豬PBMC基因組中通過PCR擴增穫得豬PD-1胞外區基因片段,測序正確後剋隆至原覈錶達載體pET-32a(+),構建重組原覈錶達質粒pET32-PD1,轉化大腸埃希菌DH5α.挑選可疑菌落鑒定正確後轉至Rosetta(DE3)進行誘導錶達,錶達產物進行SDS-PAGE和Western blot分析.結果錶明,在37℃、0.5mmol/L IPTG條件下誘導穫得33 ku的PD-1胞外區融閤蛋白,能夠被其多抗血清、His標籤抗體和人PD-1抗體所識彆.本研究為製備其單剋隆抗體和研究PD-1/PD-L1在豬免疫抑製性疾病中的作用提供瞭材料.
위연구PD-1/PD-L1통로재저면역억제성질병중적작용,근거저적PD-1적기인서렬,설계확증기포외구적인물,종저PBMC기인조중통과PCR확증획득저PD-1포외구기인편단,측서정학후극륭지원핵표체재체pET-32a(+),구건중조원핵표체질립pET32-PD1,전화대장애희균DH5α.도선가의균락감정정학후전지Rosetta(DE3)진행유도표체,표체산물진행SDS-PAGE화Western blot분석.결과표명,재37℃、0.5mmol/L IPTG조건하유도획득33 ku적PD-1포외구융합단백,능구피기다항혈청、His표첨항체화인PD-1항체소식별.본연구위제비기단극륭항체화연구PD-1/PD-L1재저면역억제성질병중적작용제공료재료.
