CAJ | 학술논문

为了建立一种同时检测O157、O26、O45、O103、O111、O121和O145等7种血清型的出血性大肠埃希菌的高通量检测方法,通过筛选比对大肠埃希菌O157血清型的fbE基因,O26、O103和O111血清型的WZX基因,O45、O121和O145血清型的WZY基因,设计了针对各个血清型的特异性引物和探针.通过在所有的特异性引物5'端加入超级引物的策略,达到了通过一次PCR反应,同时多重扩增7个血清型的7个目标片段的效果.将加尾多重扩增与液相芯片高通量检测相结合,建立了同时检测7种血清型的出血性大肠埃希菌的液相芯片检测方法,并对方法检测体系及反应条件进行了优化.所建立的7种出血性大肠埃希菌液相芯片检测方法灵敏,其灵敏度与荧光PCR的灵敏度相差100倍.所建立的方法特异,单个血清型的探针与相应的PCR扩增的阳性产物之间均有特异性的杂交,LQRR值介于17～63之间.7种血清型的混合探针与各个血清型菌株的PCR与扩增的阳性产物之间均有特异性的杂交,LQRR值介于11～23之间,与其他血清型出血性大肠埃希菌和非出血性大肠埃希菌均无交叉反应.试验结果表明,所建立的液相芯片检测大肠埃希菌O157、O26、O45、O103、O111、O121和O145等7个血清型的检测方法具有快速、特异性强、灵敏度高等特点,可用于主要出血性大肠埃希菌的快速鉴别检测.
위료건립일충동시검측O157、O26、O45、O103、O111、O121화O145등7충혈청형적출혈성대장애희균적고통량검측방법,통과사선비대대장애희균O157혈청형적fbE기인,O26、O103화O111혈청형적WZX기인,O45、O121화O145혈청형적WZY기인,설계료침대각개혈청형적특이성인물화탐침.통과재소유적특이성인물5'단가입초급인물적책략,체도료통과일차PCR반응,동시다중확증7개혈청형적7개목표편단적효과.장가미다중확증여액상심편고통량검측상결합,건립료동시검측7충혈청형적출혈성대장애희균적액상심편검측방법,병대방법검측체계급반응조건진행료우화.소건립적7충출혈성대장애희균액상심편검측방법령민,기령민도여형광PCR적령민도상차100배.소건립적방법특이,단개혈청형적탐침여상응적PCR확증적양성산물지간균유특이성적잡교,LQRR치개우17～63지간.7충혈청형적혼합탐침여각개혈청형균주적PCR여확증적양성산물지간균유특이성적잡교,LQRR치개우11～23지간,여기타혈청형출혈성대장애희균화비출혈성대장애희균균무교차반응.시험결과표명,소건립적액상심편검측대장애희균O157、O26、O45、O103、O111、O121화O145등7개혈청형적검측방법구유쾌속、특이성강、령민도고등특점,가용우주요출혈성대장애희균적쾌속감별검측.