动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
Progress in Veterinary Medicine
2015年
9期
13-17
,共5页
曹利利%姚新华%郭衍冰%王英贺%任科研%魏峰%苑淑贤
曹利利%姚新華%郭衍冰%王英賀%任科研%魏峰%苑淑賢
조리리%요신화%곽연빙%왕영하%임과연%위봉%원숙현
柔嫩艾美耳球虫%SAG2基因%卡介苗%表达
柔嫩艾美耳毬蟲%SAG2基因%卡介苗%錶達
유눈애미이구충%SAG2기인%잡개묘%표체
为获得柔嫩艾美耳球虫SAG2的克隆株并在卡介苗中表达该蛋白,根据柔嫩艾美耳球虫SAG2基因序列和表达载体图谱设计特异性引物,引入HindⅢ和EcoR Ⅰ酶切位点,RT-PCR扩增SAG2基因,连接到pMD18-T载体.双酶切后,将SAG2基因插入到大肠埃希菌-分支杆菌整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pMV361-SAG2,经电穿孔转染到卡介苗中,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析.结果成功构建了重组质粒pMD18-T-SAG2和pMV3 61-SAG2,SAG2在卡介苗中高效表达,表达产物能够被柔嫩艾美耳球虫阳性血清识别,表明具有良好的免疫原性,为下一步重组卡介苗对鸡球虫病的免疫保护研究奠定了基础.
為穫得柔嫩艾美耳毬蟲SAG2的剋隆株併在卡介苗中錶達該蛋白,根據柔嫩艾美耳毬蟲SAG2基因序列和錶達載體圖譜設計特異性引物,引入HindⅢ和EcoR Ⅰ酶切位點,RT-PCR擴增SAG2基因,連接到pMD18-T載體.雙酶切後,將SAG2基因插入到大腸埃希菌-分支桿菌整閤錶達載體pMV361中,穫得重組質粒pMV361-SAG2,經電穿孔轉染到卡介苗中,錶達產物經SDS-PAGE和Western blot分析.結果成功構建瞭重組質粒pMD18-T-SAG2和pMV3 61-SAG2,SAG2在卡介苗中高效錶達,錶達產物能夠被柔嫩艾美耳毬蟲暘性血清識彆,錶明具有良好的免疫原性,為下一步重組卡介苗對鷄毬蟲病的免疫保護研究奠定瞭基礎.
위획득유눈애미이구충SAG2적극륭주병재잡개묘중표체해단백,근거유눈애미이구충SAG2기인서렬화표체재체도보설계특이성인물,인입HindⅢ화EcoR Ⅰ매절위점,RT-PCR확증SAG2기인,련접도pMD18-T재체.쌍매절후,장SAG2기인삽입도대장애희균-분지간균정합표체재체pMV361중,획득중조질립pMV361-SAG2,경전천공전염도잡개묘중,표체산물경SDS-PAGE화Western blot분석.결과성공구건료중조질립pMD18-T-SAG2화pMV3 61-SAG2,SAG2재잡개묘중고효표체,표체산물능구피유눈애미이구충양성혈청식별,표명구유량호적면역원성,위하일보중조잡개묘대계구충병적면역보호연구전정료기출.
