中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
2015年
9期
716-720
,共5页
陶洁%廖金虎%张倩%张信军%朱国强
陶潔%廖金虎%張倩%張信軍%硃國彊
도길%료금호%장천%장신군%주국강
ISG15蛋白%猪源BVDV-2%Ⅰ型干扰素
ISG15蛋白%豬源BVDV-2%Ⅰ型榦擾素
ISG15단백%저원BVDV-2%Ⅰ형간우소
ISG15 protein%porcine bovine viral diarrhea virus type 2%typeⅠ interferon
为研究ISG15蛋白与猪源牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)相互作用关系,本研究通过RT-PCR扩增ISG15基因并克隆于真核表达载体pEC129中,转染于MDBK细胞,经G418筛选获得稳定表达ISG15蛋白的细胞系E53.将猪源BVDV-2分别感染E53细胞和MDBK细胞,收集不同时间点的细胞培养液并测定病毒的TCID50.结果显示ISG15蛋白对猪源BVDV-2复制具有明显抑制作用.利用荧光定量PCR检测猪源BVDV-2感染E53细胞内ISG15基因表达的变化,结果表明,病毒感染的E53细胞内ISG15基因的表达量明显高于对照组,表明猪源BVDV-2感染能够显著提高ISG15基因的表达.此外,利用荧光定量PCR检测经poly I:C处理后感染SH-28株的MDBK和E53细胞内IFN-α和IFN-β表达情况.结果表明MDBK细胞内IFN-α和IFN-β表达量分别下降约2.49倍和3.31倍,而在E53细胞中,IFN-α和IFN-β的表达量分别下降约6.29倍和9.71倍,表明过量表达ISG15蛋白能够促进猪源BVDV-2对Ⅰ型IFN的抑制作用.本实验为进一步研究猪源BVDV-2逃逸细胞先天免疫机制奠定了基础.
為研究ISG15蛋白與豬源牛病毒性腹瀉病毒2型(BVDV-2)相互作用關繫,本研究通過RT-PCR擴增ISG15基因併剋隆于真覈錶達載體pEC129中,轉染于MDBK細胞,經G418篩選穫得穩定錶達ISG15蛋白的細胞繫E53.將豬源BVDV-2分彆感染E53細胞和MDBK細胞,收集不同時間點的細胞培養液併測定病毒的TCID50.結果顯示ISG15蛋白對豬源BVDV-2複製具有明顯抑製作用.利用熒光定量PCR檢測豬源BVDV-2感染E53細胞內ISG15基因錶達的變化,結果錶明,病毒感染的E53細胞內ISG15基因的錶達量明顯高于對照組,錶明豬源BVDV-2感染能夠顯著提高ISG15基因的錶達.此外,利用熒光定量PCR檢測經poly I:C處理後感染SH-28株的MDBK和E53細胞內IFN-α和IFN-β錶達情況.結果錶明MDBK細胞內IFN-α和IFN-β錶達量分彆下降約2.49倍和3.31倍,而在E53細胞中,IFN-α和IFN-β的錶達量分彆下降約6.29倍和9.71倍,錶明過量錶達ISG15蛋白能夠促進豬源BVDV-2對Ⅰ型IFN的抑製作用.本實驗為進一步研究豬源BVDV-2逃逸細胞先天免疫機製奠定瞭基礎.
위연구ISG15단백여저원우병독성복사병독2형(BVDV-2)상호작용관계,본연구통과RT-PCR확증ISG15기인병극륭우진핵표체재체pEC129중,전염우MDBK세포,경G418사선획득은정표체ISG15단백적세포계E53.장저원BVDV-2분별감염E53세포화MDBK세포,수집불동시간점적세포배양액병측정병독적TCID50.결과현시ISG15단백대저원BVDV-2복제구유명현억제작용.이용형광정량PCR검측저원BVDV-2감염E53세포내ISG15기인표체적변화,결과표명,병독감염적E53세포내ISG15기인적표체량명현고우대조조,표명저원BVDV-2감염능구현저제고ISG15기인적표체.차외,이용형광정량PCR검측경poly I:C처리후감염SH-28주적MDBK화E53세포내IFN-α화IFN-β표체정황.결과표명MDBK세포내IFN-α화IFN-β표체량분별하강약2.49배화3.31배,이재E53세포중,IFN-α화IFN-β적표체량분별하강약6.29배화9.71배,표명과량표체ISG15단백능구촉진저원BVDV-2대Ⅰ형IFN적억제작용.본실험위진일보연구저원BVDV-2도일세포선천면역궤제전정료기출.
