中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
2015年
9期
699-702
,共4页
安伟%肖雨%张明辉%邵玲%高晓华%何正侃
安偉%肖雨%張明輝%邵玲%高曉華%何正侃
안위%초우%장명휘%소령%고효화%하정간
鲤春病毒血症病毒%SYBR GreenⅠ%荧光定量RT-PCR%N基因
鯉春病毒血癥病毒%SYBR GreenⅠ%熒光定量RT-PCR%N基因
리춘병독혈증병독%SYBR GreenⅠ%형광정량RT-PCR%N기인
spring viremia of carp virus%SYBR GreenⅠ%real-time RT-PCR%N gene
为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的SVCV N蛋白基因的保守性序列设计并合成特异性引物,建立了该病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法.结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.99,在102拷贝/μL～109拷贝/μL范围内具有良好的线性关系.该方法对传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、传染性皮下及组织坏死病毒和白斑综合征病毒其他水生动物病毒核酸扩增结果均为阴性,特异性强;该方法对SVCV检测下限为100.76 TCID50/mL,比常规PCR灵敏100倍;批内和批间的变异系数均小于7.6％,重复性好.本研究建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,对SVCV的快速检测及定量检测具有重要意义.
為建立鯉春病毒血癥病毒(SVCV)的熒光定量RT-PCR檢測方法,本研究根據GenBank中登錄的SVCV N蛋白基因的保守性序列設計併閤成特異性引物,建立瞭該病毒的SYBR Green Ⅰ熒光定量RT-PCR檢測方法.結果錶明,以重組質粒標準品構建的標準麯線的相關繫數為0.99,在102拷貝/μL～109拷貝/μL範圍內具有良好的線性關繫.該方法對傳染性脾腎壞死病毒、草魚呼腸孤病毒、傳染性皮下及組織壞死病毒和白斑綜閤徵病毒其他水生動物病毒覈痠擴增結果均為陰性,特異性彊;該方法對SVCV檢測下限為100.76 TCID50/mL,比常規PCR靈敏100倍;批內和批間的變異繫數均小于7.6％,重複性好.本研究建立的熒光定量RT-PCR方法靈敏度高、特異性彊、重複性好,對SVCV的快速檢測及定量檢測具有重要意義.
위건립리춘병독혈증병독(SVCV)적형광정량RT-PCR검측방법,본연구근거GenBank중등록적SVCV N단백기인적보수성서렬설계병합성특이성인물,건립료해병독적SYBR Green Ⅰ형광정량RT-PCR검측방법.결과표명,이중조질립표준품구건적표준곡선적상관계수위0.99,재102고패/μL～109고패/μL범위내구유량호적선성관계.해방법대전염성비신배사병독、초어호장고병독、전염성피하급조직배사병독화백반종합정병독기타수생동물병독핵산확증결과균위음성,특이성강;해방법대SVCV검측하한위100.76 TCID50/mL,비상규PCR령민100배;비내화비간적변이계수균소우7.6％,중복성호.본연구건립적형광정량RT-PCR방법령민도고、특이성강、중복성호,대SVCV적쾌속검측급정량검측구유중요의의.
