中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
2015年
9期
669-673
,共5页
俞军%袁海兰%欧仁建%胡鲲%杨先乐
俞軍%袁海蘭%歐仁建%鬍鯤%楊先樂
유군%원해란%구인건%호곤%양선악
水霉菌%生物膜%体外模型%结构特征
水黴菌%生物膜%體外模型%結構特徵
수매균%생물막%체외모형%결구특정
Saprolegnia%biofilm%in vitro model%structural characteristic
为体外构建水霉菌生物膜(BF)并对其形成过程与结构特征进行分析,本研究利用寄生水霉(Saprolegnia parasitica)ATCC200013在玻片和聚乙烯网片上构建水霉菌BF,筛选适宜水霉菌粘附的基质材料,并在BF形成过程中,采用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)定量检测BF的活力变化,利用Calcofluor White M2R染色后,荧光显微镜观察细胞外基质;扫描电镜观察水霉菌BF的形态结构;SYTO 9/PI染色后,激光共聚焦显微镜观察水霉菌BF的活力及结构特征.结果显示,水霉菌能够在聚乙烯网片上形成较好的BF,并且BF能够与聚乙烯网片紧密粘附,完全覆盖聚乙烯网片,而与盖玻片粘附不紧密.水霉菌BF OD450nm值在培养前24 h升高较快,48 h后趋于稳定.水霉菌在第6h即开始有散在的孢子黏附于聚乙烯网片上;12 h～24 h形成单细胞层;36 h～60 h为中间形成阶段,至72 h茵丝缠绕形成多层的、弥散着大量细胞外基质的立体结构,同时死亡茵随着培养时间延长而增多.本研究体外构建了水霉菌BF并了解其结构特征,为水霉菌BF的进一步研究奠定了基础.
為體外構建水黴菌生物膜(BF)併對其形成過程與結構特徵進行分析,本研究利用寄生水黴(Saprolegnia parasitica)ATCC200013在玻片和聚乙烯網片上構建水黴菌BF,篩選適宜水黴菌粘附的基質材料,併在BF形成過程中,採用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)定量檢測BF的活力變化,利用Calcofluor White M2R染色後,熒光顯微鏡觀察細胞外基質;掃描電鏡觀察水黴菌BF的形態結構;SYTO 9/PI染色後,激光共聚焦顯微鏡觀察水黴菌BF的活力及結構特徵.結果顯示,水黴菌能夠在聚乙烯網片上形成較好的BF,併且BF能夠與聚乙烯網片緊密粘附,完全覆蓋聚乙烯網片,而與蓋玻片粘附不緊密.水黴菌BF OD450nm值在培養前24 h升高較快,48 h後趨于穩定.水黴菌在第6h即開始有散在的孢子黏附于聚乙烯網片上;12 h～24 h形成單細胞層;36 h～60 h為中間形成階段,至72 h茵絲纏繞形成多層的、瀰散著大量細胞外基質的立體結構,同時死亡茵隨著培養時間延長而增多.本研究體外構建瞭水黴菌BF併瞭解其結構特徵,為水黴菌BF的進一步研究奠定瞭基礎.
위체외구건수매균생물막(BF)병대기형성과정여결구특정진행분석,본연구이용기생수매(Saprolegnia parasitica)ATCC200013재파편화취을희망편상구건수매균BF,사선괄의수매균점부적기질재료,병재BF형성과정중,채용CCK-8법(Cell Counting Kit-8)정량검측BF적활력변화,이용Calcofluor White M2R염색후,형광현미경관찰세포외기질;소묘전경관찰수매균BF적형태결구;SYTO 9/PI염색후,격광공취초현미경관찰수매균BF적활력급결구특정.결과현시,수매균능구재취을희망편상형성교호적BF,병차BF능구여취을희망편긴밀점부,완전복개취을희망편,이여개파편점부불긴밀.수매균BF OD450nm치재배양전24 h승고교쾌,48 h후추우은정.수매균재제6h즉개시유산재적포자점부우취을희망편상;12 h～24 h형성단세포층;36 h～60 h위중간형성계단,지72 h인사전요형성다층적、미산착대량세포외기질적입체결구,동시사망인수착배양시간연장이증다.본연구체외구건료수매균BF병료해기결구특정,위수매균BF적진일보연구전정료기출.
