中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
2015年
9期
665-668
,共4页
于会彬%黄丽%张元峰%李江南%蔡雪辉%崔尚金%翁长江
于會彬%黃麗%張元峰%李江南%蔡雪輝%崔尚金%翁長江
우회빈%황려%장원봉%리강남%채설휘%최상금%옹장강
猪脑心肌炎病毒%cDNA感染性克隆%转录转染%病毒拯救
豬腦心肌炎病毒%cDNA感染性剋隆%轉錄轉染%病毒拯救
저뇌심기염병독%cDNA감염성극륭%전록전염%병독증구
encephalomyocarditis virus%cDNA clone%transcription and transfection%virus rescue
为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV) HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB 10株全长基因组(包括5’和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB 10.将重组质粒体外转录后转染BHK-21细胞进行病毒拯救.结果显示,转染细胞36 h后,出现典型的细胞病变.拯救病毒rEMCV-HB 10全基因组经测序鉴定显示,与亲本病毒开放阅读框比较,其仅在1D基因出现两个核苷酸突变:即A37G (R13K)和G187C (M63I),该突变可以作为区别亲本病毒的标志.间接免疫荧光和生长曲线试验结果显示,这两个突变并不影响VP1蛋白的表达及病毒拯救,并且拯救病毒与亲本病毒具有相似的生长特性.本研究构建了感染性EMCV-HB 10 cDNA克隆,为深入研究EMCV的致病分子机理提供了有效的反向遗传操作平台.
為建立豬腦心肌炎病毒(EMCV) HB10株cDNA感染性剋隆,本研究利用反嚮遺傳操作技術,採用RT-PCR一次性擴增EMCV-HB 10株全長基因組(包括5’和3'UTR)序列,併直接剋隆于低拷貝載體pOK12中,構建瞭EMCV感染性重組質粒pOK12-EMCV-HB 10.將重組質粒體外轉錄後轉染BHK-21細胞進行病毒拯救.結果顯示,轉染細胞36 h後,齣現典型的細胞病變.拯救病毒rEMCV-HB 10全基因組經測序鑒定顯示,與親本病毒開放閱讀框比較,其僅在1D基因齣現兩箇覈苷痠突變:即A37G (R13K)和G187C (M63I),該突變可以作為區彆親本病毒的標誌.間接免疫熒光和生長麯線試驗結果顯示,這兩箇突變併不影響VP1蛋白的錶達及病毒拯救,併且拯救病毒與親本病毒具有相似的生長特性.本研究構建瞭感染性EMCV-HB 10 cDNA剋隆,為深入研究EMCV的緻病分子機理提供瞭有效的反嚮遺傳操作平檯.
위건립저뇌심기염병독(EMCV) HB10주cDNA감염성극륭,본연구이용반향유전조작기술,채용RT-PCR일차성확증EMCV-HB 10주전장기인조(포괄5’화3'UTR)서렬,병직접극륭우저고패재체pOK12중,구건료EMCV감염성중조질립pOK12-EMCV-HB 10.장중조질립체외전록후전염BHK-21세포진행병독증구.결과현시,전염세포36 h후,출현전형적세포병변.증구병독rEMCV-HB 10전기인조경측서감정현시,여친본병독개방열독광비교,기부재1D기인출현량개핵감산돌변:즉A37G (R13K)화G187C (M63I),해돌변가이작위구별친본병독적표지.간접면역형광화생장곡선시험결과현시,저량개돌변병불영향VP1단백적표체급병독증구,병차증구병독여친본병독구유상사적생장특성.본연구구건료감염성EMCV-HB 10 cDNA극륭,위심입연구EMCV적치병분자궤리제공료유효적반향유전조작평태.
