中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
Journal of Experimental Hematology
2015年
4期
1112-1119
,共8页
吴洁莹%陆琰%陈劲松%吴韶清%汤雪薇%李焱
吳潔瑩%陸琰%陳勁鬆%吳韶清%湯雪薇%李焱
오길형%륙염%진경송%오소청%탕설미%리염
脐带间充质干细胞%脐带血血浆%CD34+细胞%体外扩增
臍帶間充質榦細胞%臍帶血血漿%CD34+細胞%體外擴增
제대간충질간세포%제대혈혈장%CD34+세포%체외확증
umbilical cord mesenchymal stem cell%umbilical cord blood plasma%CD34+ cell%ex vivo expansion
目的:探讨以脐带血血浆替代胎牛血清体外分离培养脐带间充质干细胞(UCMSC)的可行性,并观察其作为滋养层细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的支持作用.方法:收集符合广州脐血库供者合格筛选标准的脐带血,在脐带血干细胞制备过程中去除的血浆,经病原学及微生物检测合格,多份混合用于细胞培养.采用酶消化法从健康足月分娩新生儿的脐带组织分离获得UCMSC,将其分为3组.培养第1和第2组以DMEM/F12为基础培养液,分别添加胎牛血清(FBS)和混合脐带血血浆(UCP),第3组为商品化无血清培养液(StemPro(R) MSC SFM CTSTM).经培养扩增后,采用流式细胞仪检测细胞免疫表型,并进行MSC成骨、成脂分化鉴定.取冻存复苏后的3组细胞,标记为UCMSCFBS、UCMSCUCP及UCMSCSFM,分别建立滋养层.应用免疫磁珠分选系统(MACS)分选人脐带血CD34+细胞,在添加造血因子组合(StemSpan(R)CC100)的CD34+无血清培养液(StemPro-34 SFM)中培养,并根据滋养层的不同,分为4组:A组CD34+细胞(CD34+ cells)为空白对照组;B组为FBS滋养层组(UCMSCFBS+ CD34+ cells),C组为UCP滋养层组(UCMSCUCP+ CD34+ cells),D组为SF滋养层组(UCMSCSFM+ CD34+cells).于培养第0天和第7天计数各组的有核细胞数(NC)、流式细胞仪检测CD34+比例,并进行造血祖细胞集落培养,评估扩增效率.结果:在3种培养体系下的UCMSC均呈现典型的梭形漩涡状生长,MSC表面标记的表达谱系基本无差异,均具有向成脂、成骨分化的能力,但在UCP培养条件下细胞的扩增能力显著高于其他2组(P＜0.05).经过7d与脐带血CD34+细胞的共培养,虽然4组的CD34+细胞比例均下降,但NC及CD34+细胞数均得到显著扩增,其中UCMSCUCP滋养层组和UCMSCSFM滋养层组均大于UCMSCFBS滋养层组和空白对照组(P＜0.05).与第0天的集落形成能力比较,UCMSCUCP滋养层组与UCMSCSFM滋养层组的集落扩增倍数无差异,但前者的扩增倍数高于UCMSCFBS及空白对照组.结论:UCP可作为一种较为理想的无动物源性的血清补充物,用于UCMSC的分离培养并维持其生长、增殖、分化,是临床级MSC大量扩增培养体系较为安全的选择.
目的:探討以臍帶血血漿替代胎牛血清體外分離培養臍帶間充質榦細胞(UCMSC)的可行性,併觀察其作為滋養層細胞對臍血CD34+細胞體外擴增的支持作用.方法:收集符閤廣州臍血庫供者閤格篩選標準的臍帶血,在臍帶血榦細胞製備過程中去除的血漿,經病原學及微生物檢測閤格,多份混閤用于細胞培養.採用酶消化法從健康足月分娩新生兒的臍帶組織分離穫得UCMSC,將其分為3組.培養第1和第2組以DMEM/F12為基礎培養液,分彆添加胎牛血清(FBS)和混閤臍帶血血漿(UCP),第3組為商品化無血清培養液(StemPro(R) MSC SFM CTSTM).經培養擴增後,採用流式細胞儀檢測細胞免疫錶型,併進行MSC成骨、成脂分化鑒定.取凍存複囌後的3組細胞,標記為UCMSCFBS、UCMSCUCP及UCMSCSFM,分彆建立滋養層.應用免疫磁珠分選繫統(MACS)分選人臍帶血CD34+細胞,在添加造血因子組閤(StemSpan(R)CC100)的CD34+無血清培養液(StemPro-34 SFM)中培養,併根據滋養層的不同,分為4組:A組CD34+細胞(CD34+ cells)為空白對照組;B組為FBS滋養層組(UCMSCFBS+ CD34+ cells),C組為UCP滋養層組(UCMSCUCP+ CD34+ cells),D組為SF滋養層組(UCMSCSFM+ CD34+cells).于培養第0天和第7天計數各組的有覈細胞數(NC)、流式細胞儀檢測CD34+比例,併進行造血祖細胞集落培養,評估擴增效率.結果:在3種培養體繫下的UCMSC均呈現典型的梭形漩渦狀生長,MSC錶麵標記的錶達譜繫基本無差異,均具有嚮成脂、成骨分化的能力,但在UCP培養條件下細胞的擴增能力顯著高于其他2組(P＜0.05).經過7d與臍帶血CD34+細胞的共培養,雖然4組的CD34+細胞比例均下降,但NC及CD34+細胞數均得到顯著擴增,其中UCMSCUCP滋養層組和UCMSCSFM滋養層組均大于UCMSCFBS滋養層組和空白對照組(P＜0.05).與第0天的集落形成能力比較,UCMSCUCP滋養層組與UCMSCSFM滋養層組的集落擴增倍數無差異,但前者的擴增倍數高于UCMSCFBS及空白對照組.結論:UCP可作為一種較為理想的無動物源性的血清補充物,用于UCMSC的分離培養併維持其生長、增殖、分化,是臨床級MSC大量擴增培養體繫較為安全的選擇.
목적:탐토이제대혈혈장체대태우혈청체외분리배양제대간충질간세포(UCMSC)적가행성,병관찰기작위자양층세포대제혈CD34+세포체외확증적지지작용.방법:수집부합엄주제혈고공자합격사선표준적제대혈,재제대혈간세포제비과정중거제적혈장,경병원학급미생물검측합격,다빈혼합용우세포배양.채용매소화법종건강족월분면신생인적제대조직분리획득UCMSC,장기분위3조.배양제1화제2조이DMEM/F12위기출배양액,분별첨가태우혈청(FBS)화혼합제대혈혈장(UCP),제3조위상품화무혈청배양액(StemPro(R) MSC SFM CTSTM).경배양확증후,채용류식세포의검측세포면역표형,병진행MSC성골、성지분화감정.취동존복소후적3조세포,표기위UCMSCFBS、UCMSCUCP급UCMSCSFM,분별건립자양층.응용면역자주분선계통(MACS)분선인제대혈CD34+세포,재첨가조혈인자조합(StemSpan(R)CC100)적CD34+무혈청배양액(StemPro-34 SFM)중배양,병근거자양층적불동,분위4조:A조CD34+세포(CD34+ cells)위공백대조조;B조위FBS자양층조(UCMSCFBS+ CD34+ cells),C조위UCP자양층조(UCMSCUCP+ CD34+ cells),D조위SF자양층조(UCMSCSFM+ CD34+cells).우배양제0천화제7천계수각조적유핵세포수(NC)、류식세포의검측CD34+비례,병진행조혈조세포집락배양,평고확증효솔.결과:재3충배양체계하적UCMSC균정현전형적사형선와상생장,MSC표면표기적표체보계기본무차이,균구유향성지、성골분화적능력,단재UCP배양조건하세포적확증능력현저고우기타2조(P＜0.05).경과7d여제대혈CD34+세포적공배양,수연4조적CD34+세포비례균하강,단NC급CD34+세포수균득도현저확증,기중UCMSCUCP자양층조화UCMSCSFM자양층조균대우UCMSCFBS자양층조화공백대조조(P＜0.05).여제0천적집락형성능력비교,UCMSCUCP자양층조여UCMSCSFM자양층조적집락확증배수무차이,단전자적확증배수고우UCMSCFBS급공백대조조.결론:UCP가작위일충교위이상적무동물원성적혈청보충물,용우UCMSC적분리배양병유지기생장、증식、분화,시림상급MSC대량확증배양체계교위안전적선택.
